本文選題：法醫(yī)昆蟲毒理學(xué)　切入點：氯胺酮　出處：《河南科技大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景與目的近年來，涉毒死亡相關(guān)案件逐年增多。而在懷疑中毒死的高度腐敗或白骨化尸體上，利用昆蟲毒理學(xué)推斷死后經(jīng)歷時間（postmortem interval，PMI）已成為法醫(yī)學(xué)死亡時間推斷的一種必要手段。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)在不同的環(huán)境溫度（32℃、28℃、24℃）條件下，氯胺酮能不同程度延緩大頭金蠅生長發(fā)育速度，延長發(fā)育歷期，這種影響與環(huán)境溫度、氯胺酮劑量和兩者之間的交互作用均有關(guān)。但氯胺酮在較低溫度條件下，對大頭金蠅生長發(fā)育影響尚無定論。因此，我們通過觀察20℃時氯胺酮對大頭金蠅生長發(fā)育影響的效果，探討溫度、藥物二者對大頭金蠅生長發(fā)育影響及量效關(guān)系，以期為較低溫度條件下推斷PMI提供法醫(yī)昆蟲毒理學(xué)依據(jù)。 方法將河南科技大學(xué)校園采集的大頭金蠅在室內(nèi)飼養(yǎng)至第三代作為母代育種組飼養(yǎng)。將新鮮的豬肉攪碎混入煮沸的瓊脂糖粉、蒸餾水中制成培養(yǎng)基，按氯胺酮半數(shù)致死量（50mg/kg）計算，分別向培養(yǎng)基內(nèi)加入0、0.5倍、1倍、2倍半數(shù)致死量的氯胺酮，充分混勻后低溫靜置保存，分別標(biāo)記為K_0、K_(1/2)、K_1、K_2。室溫下用新鮮豬肉誘使育種組產(chǎn)卵，將0.5h內(nèi)所產(chǎn)卵塊稱重后隨機均分為4份，隨機接種后將培養(yǎng)基置入20℃恒溫室內(nèi)孵育，濕度（75±10）%，，光照周期設(shè)為12h:12h。卵塊孵化后16h隨機取樣，每隔12h留取一次直至成蛹，分別用于生長發(fā)育指標(biāo)觀察和幼蟲體內(nèi)藥物檢測。（1）測量各發(fā)育歷期蠅體長、體重(X±SD)，繪制生長曲線。以蠅卵孵化的時間作為大頭金蠅發(fā)育歷期零點，記錄產(chǎn)卵時間、孵化時間、離食時間、化蛹時間和羽化時間，計算發(fā)育積溫和羽化率。重復(fù)以上實驗。（2）將留測樣品解凍，在研磨皿中研碎，加鹽酸、石油醚震蕩，離心去除上清液，堿化后氯仿萃取，待萃取液濃縮后加入內(nèi)標(biāo)利多卡因，再用無水乙醇定容至100μL，以利多卡因為內(nèi)標(biāo)，SIM方式進樣用GC-MS技術(shù)檢測蟲體內(nèi)氯胺酮含量。使用SPSS18.0軟件處理分析數(shù)據(jù)，應(yīng)用單因素方差分析和新復(fù)極差檢驗法探討氯胺酮與20℃低溫對大頭金蠅生長發(fā)育影響量效關(guān)系。 結(jié)果20℃條件下大頭金蠅生長發(fā)育各項觀察指標(biāo)及幼蟲體內(nèi)氯胺酮檢測結(jié)果如下： 一、生長發(fā)育指標(biāo)觀察 （1）體長、體重變化。各組大頭金蠅幼蟲均在32h左右孵化，孵化后16、28、40、52小時K_0、K_(1/2)、K_1、K_2各組體長、體重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異。64~76h時體長K_(1/2)＞K_1＞K_2＞K_0，88~124h時體長大小K_(1/2)＞K_0＞K_1＞K_2，第136h各組之間體長無差異；64h時體重K_0＞K_(1/2)＞K_1＞K_2；76~136h時，體重大小依次是K_(1/2)＞K_0＞K_1＞K_2；148~196h（至離食期）體長、體重均為K_1＞K_0＞K_(1/2)＞K_2。各組在196h時體長均達到最大值，四組間最大平均體長有顯著差異（P＜0.05），其分別是15.34±0.74mm、14.69±0.94mm、15.95±1.21mm、13.72±0.41mm，其體長增長速度分別為0.071m/h、0.06475m/h、0.073m/h、0.0615m/h。K_0、K_1于184h到達最大體重，K_(1/2)、 K_2于196h到達最大體重，4組最大體重分別為102.57±2.32mg、93.41±1.12mg、115.11±1.73mg、90.46±2.74mg，其體重增長速度分別為0.0685mg/h、0.5306mg/h、0.6830mg/h、0.5008mg/h。 （2）發(fā)育歷期變化。各組大頭金蠅均在產(chǎn)卵后32h孵化，以孵化時間為零點，離食時間：K_0、K_1、K_2在產(chǎn)卵后196h，K_(1/2)組在184h；化蛹時間：K_0、K_(1/2)、K_1均為232h，K_2組234h；羽化時間：各組依次為484h、489h、486h、494h；總發(fā)育歷期：各組分別為516h、521h、518h、526h。其中，卵期最短，蛹期最長，各階段的發(fā)育歷期由長到短的次序為蛹期、幼蟲期、離食期、卵期。4組孵化時間相同，K_0組在196h離食。K_(1/2)組幼蟲離食期比對照組延長12h，但K_1、K_2組與對照組無明顯差異。與對照組相比，蛹期實驗組分別延遲5h、2h、8h，總發(fā)育歷期分別延遲5h、2h、10h。 （3）發(fā)育積溫和羽化率。從產(chǎn)卵至羽化，20℃條件下，各組大頭金蠅積溫分別為2580、2605、2590和2630ADH。實驗組的平均發(fā)育積溫較對照組分別增加了25、10和50ADH。各組羽化率分別為69%、65%、58%、40%，3個實驗組的平均羽化率為53%。與對照組相比，其下降16%。四組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。 二、蟲體內(nèi)氯胺酮的含量及變化規(guī)律 鹽酸氯胺酮的檢測限為0.1μg/mL(信噪比3)，線性范圍為5～3000μg/mL，回歸方程為：y=0.0714x+0.4051R2=0.9983(n=5)。100、500、1000μg/mL三個濃度鹽酸氯胺酮溶液檢測方法的回收率，分別為97.6%，93.6%和93.5%，在88、112、124、136、160、184h時間段中，蟲體氯胺酮含量，均在160h達最大峰，其曲線峰型呈先升高后降低。結(jié)論本課題研究獲得20℃條件下氯胺酮對大頭金蠅體生長發(fā)育影響的數(shù)據(jù)，建立了大頭金蠅幼蟲檢材中氯胺酮的GC/MS快速提取、檢測方法。研究結(jié)果表明，在實驗劑量范圍內(nèi)，氯胺酮對大頭金蠅生長發(fā)育速度、發(fā)育歷期均存在一定的影響，且這種影響與幼蟲體內(nèi)氯胺酮殘余量間存在一定程度的相關(guān)性，實驗組表現(xiàn)為氯胺酮殘留量越大，抑制作用越明顯，這可能與氯胺酮在蠅體內(nèi)的代謝有關(guān)。
[Abstract]:Background and objective: in recent years, drug-related death cases increased year by year. But at the height of the bones of the dead bodies of corruption or suspected poisoning death, the inference time after the death of insect toxicology (postmortem interval PMI) has become a necessary means to estimate the time of death in forensic medicine. Previous study found that in a different environment temperature (32 c, 28 C, 24 c) under the condition of different degree of ketamine can delay megacephala growth rate, prolong the growth period, the effect of environmental temperature, the interaction between the two are related to the dose of ketamine and ketamine. But at lower temperatures, the growth and development of Chrysomya megacephala inconclusive. Therefore, we observe 20 degrees of ketamine on Chrysomya megacephala growth effect of temperature, the two drugs affect the growth and development and the dose effect relationship of Chrysomya megacephala, in order to lower It is inferred that PMI provides forensic insect toxicology basis under the temperature condition.
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本文編號：1575660