本文關鍵詞： 法醫(yī)病理學 real-time PCR 免疫組化 早期心肌缺血 心源性猝死　出處：《山西醫(yī)科大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景 世界衛(wèi)生組織(WHO)報告，到2030年缺血性心臟病將成為威脅人類健康的第二大疾病，其中冠狀動脈阻塞引起的心肌缺血是缺血性心臟病各種病因中最主要的一個。冠心病在我國的發(fā)病率逐年上升，病死率與致殘率居高不下，已構(gòu)成心源性猝死的主要死因之一。由于近些年來在心血管疾病機理和治療藥物方面的不斷研究和發(fā)展，對于急性心肌梗死(AMI)的診斷和治療獲得了明顯的改善，但AMI仍然是一類致死率很高的疾病，在法醫(yī)學檢案工作中心源性猝死的發(fā)生率也是愈來愈高。法醫(yī)學實踐也發(fā)現(xiàn)：如果心肌缺血發(fā)生在室間隔等重要部位，即使是微小的梗死也會引起心源性猝死。冠心病病人約有1/4無明顯的胸痛等典型癥狀，約50%無典型的心電圖改變。尤其是早期心肌缺血導致的心源性猝死常常缺乏典型的病理學改變及形態(tài)學支持，從而給此類案件的準確鑒定造成困難。曾認為對心肌梗死較為靈敏的診斷標記物包括CK-MB、心肌肌鈣蛋白、肌紅蛋白和心型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)等。雖然CK-MB和心肌肌鈣蛋白是目前診斷心肌梗死的金標準，但鑒于二者只在AMI發(fā)生后3-4小時才開始升高，而且有報告稱肌紅蛋白和H-FABP對診斷AMI特異性并不高，因此亟待尋找更為靈敏可靠的早期心肌缺血標記物。 了解急性心肌缺血早期分子變化的機制，對于尋找可靠的早期心肌缺血標記物具有重要的意義。我們課題組在前期應用抑制消減雜交(SSH)技術(shù)，篩選出一些與心肌缺血相關的分子序列，包括Cathepsin L(CTSL)、Sjogren Syndrome antigen B(SSB)、Basigin(BSG)、Unc-45 homolog A(Unc45a)，但它們與心肌缺血發(fā)生的相關性及隨時間變化的趨勢、機制并不清楚，這些方面的內(nèi)容需要進一步研究證實。為此，本實驗設計如下：①建立成年大鼠心肌缺血模型，設置四個觀察時間點15min、30min、1h和2h，以real-time PCR方法觀察此模型中四種基因表達量在這四個時間點有無改變，如有改變趨勢如何；②挑選出表達量有改變且趨勢穩(wěn)健的基因，選取山西醫(yī)科大學法醫(yī)病理教研室2010~2011年間鑒定的案件中被鑒定為心源性猝死的固定心肌組織，以免疫組化SABC法觀察目標蛋白在人體心肌中的表達情況，初步探究該分子作為急性缺血早期標記物在實際檢案中的應用意義。 研究目的 觀察四種目的基因CTSL、SSB、BSG、Unc45a在早期缺血心肌中的表達變化及趨勢，，并初步探討其機制和在臨床醫(yī)學和法醫(yī)學中的應用及意義。 材料方法 1.成年SD雄性大鼠(4~6月齡)，36只(n=52只，實驗過程中死亡16只，實際用于實驗研究36只)，體重250~300g，隨機分為三組：實驗組(又分成缺血區(qū)EIM組與非缺血區(qū)NIM組，取自同只大鼠作為自身對照)、假手術(shù)組(SO)和空白組。以GAPDH為內(nèi)參照，應用real-time PCR方法觀察四種分子mRNA在四個時間點15min、30min、1h和2h的表達量變化，每時間點n=6。 2. 36例成年男性固定心臟組織樣本，取自山西醫(yī)科大學法醫(yī)病理教研室2010~2011年間鑒定的案件，死者年齡范圍在38~76歲之間，心臟重量300~450g。其中20例被鑒定為心源性猝死，冠狀動脈存在不同部位Ⅲ~Ⅳ的狹窄；16例被鑒定為非心源性其他原因?qū)е碌乃劳�，冠脈及心臟其余部位均無異常，作為正常對照。運用免疫組化SABC法檢測趨勢穩(wěn)定的目標蛋白在人體缺血心肌中的表達情況。 結(jié)果 1.四種基因mRNA在缺血心肌中的表達量均發(fā)生了變化，其中CTSL隨時間推進呈現(xiàn)穩(wěn)定的升高趨勢，BSG呈現(xiàn)較為穩(wěn)定的先下降后恢復的趨勢。其余兩種基因表達量變化無明顯規(guī)律可循。 2.與NIM組、假手術(shù)組及空白組相比，EIM組CTSL mRNA表達量在15min無統(tǒng)計學意義(p0.05)，30min、1h和2h時分別升高1.4倍、3.1倍和4.5倍(p0.05)；其余三組間差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。BSG mRNA表達量在缺血15min時出現(xiàn)降低，1h時降到SO組的一半量，差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)，至2h時恢復到SO組水平。 3.在20例冠脈狹窄程度Ⅲ~Ⅳ級的SCD死者心臟中的CTSL表達明顯增強，其余16例正常對照心臟中CTSL無表達或呈弱表達。 結(jié)論 本研究首次發(fā)現(xiàn)，大鼠心肌缺血后早期即可檢測到CTSL mRNA的升高，并且隨時間的推移存在一定的正相關性。在SCD冠脈狹窄死者缺血心肌中CTSL高表達，在人體缺血心肌中的表達特異性良好。提示CTSL基因可能作為SCD早期診斷的新指標。
[Abstract]:Background of the study Heart - induced sudden death caused by coronary artery occlusion ( AMI ) is a major cause of sudden cardiac death in the past few years . Although CK - MB and cardiac troponin are the major causes of sudden cardiac death , the incidence of sudden cardiac death in patients with coronary heart disease has been increasing year by year . To investigate the mechanism of early molecular changes of acute myocardial ischemia , it is very important to find reliable early myocardial ischemia markers . In the early application , we screened some molecular sequences related to myocardial ischemia , including CTSL , Sjogren ' s antigen B ( SSB ) , Basigin ( BSG ) , Unc - 45 渭A ( . Purpose of study To observe the expression of CTSL , SSB , BSG , BSG in early ischemic myocardium and to explore its mechanism and its application and significance in clinical medicine and forensic medicine . Material method 1 . Adult SD male rats ( 4 - 6 months old ) , 36 rats ( n = 52 , died 16 in the course of the experiment ) , weighing 250 - 300 g , were randomly divided into three groups : the experimental group ( divided into the EIM group and the non - ischemic zone NIM group , taken from the same rat as its own control ) , the sham operation group ( SO ) and the blank group . 2.36 adult male fixed cardiac tissue samples were taken from the cases identified between the ages of 38 - 76 and heart weight of 300 - 450 g . Among them , 20 of them were identified as cardiac sudden death , coronary artery had stenosis of 鈪

本文編號：1444444