本文關(guān)鍵詞： 法醫(yī)病理學(xué) real-time PCR 免疫組化 早期心肌缺血 心源性猝死　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2012年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景 世界衛(wèi)生組織(WHO)報(bào)告，到2030年缺血性心臟病將成為威脅人類健康的第二大疾病，其中冠狀動(dòng)脈阻塞引起的心肌缺血是缺血性心臟病各種病因中最主要的一個(gè)。冠心病在我國(guó)的發(fā)病率逐年上升，病死率與致殘率居高不下，已構(gòu)成心源性猝死的主要死因之一。由于近些年來(lái)在心血管疾病機(jī)理和治療藥物方面的不斷研究和發(fā)展，對(duì)于急性心肌梗死(AMI)的診斷和治療獲得了明顯的改善，但AMI仍然是一類致死率很高的疾病，在法醫(yī)學(xué)檢案工作中心源性猝死的發(fā)生率也是愈來(lái)愈高。法醫(yī)學(xué)實(shí)踐也發(fā)現(xiàn)：如果心肌缺血發(fā)生在室間隔等重要部位，即使是微小的梗死也會(huì)引起心源性猝死。冠心病病人約有1/4無(wú)明顯的胸痛等典型癥狀，約50%無(wú)典型的心電圖改變。尤其是早期心肌缺血導(dǎo)致的心源性猝死常常缺乏典型的病理學(xué)改變及形態(tài)學(xué)支持，從而給此類案件的準(zhǔn)確鑒定造成困難。曾認(rèn)為對(duì)心肌梗死較為靈敏的診斷標(biāo)記物包括CK-MB、心肌肌鈣蛋白、肌紅蛋白和心型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-FABP)等。雖然CK-MB和心肌肌鈣蛋白是目前診斷心肌梗死的金標(biāo)準(zhǔn)，但鑒于二者只在AMI發(fā)生后3-4小時(shí)才開(kāi)始升高，而且有報(bào)告稱肌紅蛋白和H-FABP對(duì)診斷AMI特異性并不高，因此亟待尋找更為靈敏可靠的早期心肌缺血標(biāo)記物。 了解急性心肌缺血早期分子變化的機(jī)制，對(duì)于尋找可靠的早期心肌缺血標(biāo)記物具有重要的意義。我們課題組在前期應(yīng)用抑制消減雜交(SSH)技術(shù)，篩選出一些與心肌缺血相關(guān)的分子序列，包括Cathepsin L(CTSL)、Sjogren Syndrome antigen B(SSB)、Basigin(BSG)、Unc-45 homolog A(Unc45a)，但它們與心肌缺血發(fā)生的相關(guān)性及隨時(shí)間變化的趨勢(shì)、機(jī)制并不清楚，這些方面的內(nèi)容需要進(jìn)一步研究證實(shí)。為此，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下：①建立成年大鼠心肌缺血模型，設(shè)置四個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)15min、30min、1h和2h，以real-time PCR方法觀察此模型中四種基因表達(dá)量在這四個(gè)時(shí)間點(diǎn)有無(wú)改變，如有改變趨勢(shì)如何；②挑選出表達(dá)量有改變且趨勢(shì)穩(wěn)健的基因，選取山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)病理教研室2010~2011年間鑒定的案件中被鑒定為心源性猝死的固定心肌組織，以免疫組化SABC法觀察目標(biāo)蛋白在人體心肌中的表達(dá)情況，初步探究該分子作為急性缺血早期標(biāo)記物在實(shí)際檢案中的應(yīng)用意義。 研究目的 觀察四種目的基因CTSL、SSB、BSG、Unc45a在早期缺血心肌中的表達(dá)變化及趨勢(shì)，，并初步探討其機(jī)制和在臨床醫(yī)學(xué)和法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用及意義。 材料方法 1.成年SD雄性大鼠(4~6月齡)，36只(n=52只，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中死亡16只，實(shí)際用于實(shí)驗(yàn)研究36只)，體重250~300g，隨機(jī)分為三組：實(shí)驗(yàn)組(又分成缺血區(qū)EIM組與非缺血區(qū)NIM組，取自同只大鼠作為自身對(duì)照)、假手術(shù)組(SO)和空白組。以GAPDH為內(nèi)參照，應(yīng)用real-time PCR方法觀察四種分子mRNA在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)15min、30min、1h和2h的表達(dá)量變化，每時(shí)間點(diǎn)n=6。 2. 36例成年男性固定心臟組織樣本，取自山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)病理教研室2010~2011年間鑒定的案件，死者年齡范圍在38~76歲之間，心臟重量300~450g。其中20例被鑒定為心源性猝死，冠狀動(dòng)脈存在不同部位Ⅲ~Ⅳ的狹窄；16例被鑒定為非心源性其他原因?qū)е碌乃劳觯诿}及心臟其余部位均無(wú)異常，作為正常對(duì)照。運(yùn)用免疫組化SABC法檢測(cè)趨勢(shì)穩(wěn)定的目標(biāo)蛋白在人體缺血心肌中的表達(dá)情況。 結(jié)果 1.四種基因mRNA在缺血心肌中的表達(dá)量均發(fā)生了變化，其中CTSL隨時(shí)間推進(jìn)呈現(xiàn)穩(wěn)定的升高趨勢(shì)，BSG呈現(xiàn)較為穩(wěn)定的先下降后恢復(fù)的趨勢(shì)。其余兩種基因表達(dá)量變化無(wú)明顯規(guī)律可循。 2.與NIM組、假手術(shù)組及空白組相比，EIM組CTSL mRNA表達(dá)量在15min無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)，30min、1h和2h時(shí)分別升高1.4倍、3.1倍和4.5倍(p0.05)；其余三組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。BSG mRNA表達(dá)量在缺血15min時(shí)出現(xiàn)降低，1h時(shí)降到SO組的一半量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)，至2h時(shí)恢復(fù)到SO組水平。 3.在20例冠脈狹窄程度Ⅲ~Ⅳ級(jí)的SCD死者心臟中的CTSL表達(dá)明顯增強(qiáng)，其余16例正常對(duì)照心臟中CTSL無(wú)表達(dá)或呈弱表達(dá)。 結(jié)論 本研究首次發(fā)現(xiàn)，大鼠心肌缺血后早期即可檢測(cè)到CTSL mRNA的升高，并且隨時(shí)間的推移存在一定的正相關(guān)性。在SCD冠脈狹窄死者缺血心肌中CTSL高表達(dá)，在人體缺血心肌中的表達(dá)特異性良好。提示CTSL基因可能作為SCD早期診斷的新指標(biāo)。
[Abstract]:Background of the study Heart - induced sudden death caused by coronary artery occlusion ( AMI ) is a major cause of sudden cardiac death in the past few years . Although CK - MB and cardiac troponin are the major causes of sudden cardiac death , the incidence of sudden cardiac death in patients with coronary heart disease has been increasing year by year . To investigate the mechanism of early molecular changes of acute myocardial ischemia , it is very important to find reliable early myocardial ischemia markers . In the early application , we screened some molecular sequences related to myocardial ischemia , including CTSL , Sjogren ' s antigen B ( SSB ) , Basigin ( BSG ) , Unc - 45 渭A ( . Purpose of study To observe the expression of CTSL , SSB , BSG , BSG in early ischemic myocardium and to explore its mechanism and its application and significance in clinical medicine and forensic medicine . Material method 1 . Adult SD male rats ( 4 - 6 months old ) , 36 rats ( n = 52 , died 16 in the course of the experiment ) , weighing 250 - 300 g , were randomly divided into three groups : the experimental group ( divided into the EIM group and the non - ischemic zone NIM group , taken from the same rat as its own control ) , the sham operation group ( SO ) and the blank group . 2.36 adult male fixed cardiac tissue samples were taken from the cases identified between the ages of 38 - 76 and heart weight of 300 - 450 g . Among them , 20 of them were identified as cardiac sudden death , coronary artery had stenosis of 鈪

本文編號(hào)：1444444