本文關(guān)鍵詞：乙醇對原代培養(yǎng)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細胞影響的掃描電鏡及CYP2E1、iNOS和NSE表達的研究　出處：《鄭州大學(xué)》2011年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景與目的： 乙醇對大腦有神經(jīng)毒性作用,進入神經(jīng)系統(tǒng)后可對細胞產(chǎn)生直接毒性作用。乙醇能引起神經(jīng)行為的改變,隨著血中乙醇濃度的升高,人的注意力、判斷力及辨別力均會不同程度受損,而可能引發(fā)各種刑事案件和民事案件,因此很有必要對乙醇與機體的作用進行深入的研究。本研究用不同濃度乙醇作用原代培養(yǎng)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細胞后,采用倒置顯微鏡、HE染色及掃描電鏡觀察皮質(zhì)神經(jīng)細胞形態(tài)的改變；采用免疫組化SP法,研究皮質(zhì)神經(jīng)細胞CYP2E1、iNOS和NSE表達的時序性變化,探討它們之間的相互關(guān)系以及參與腦損傷的機理。 方法： 1、采用清潔級新生SD大鼠(出生后24h內(nèi)),分離大腦皮質(zhì),進行體外培養(yǎng),采用免疫組化SP法進行皮質(zhì)神經(jīng)細胞的純度鑒定,選擇皮質(zhì)神經(jīng)細胞純度高、生長狀態(tài)良好的細胞隨機分為對照組及低、中和高劑量組。低、中和高劑量組在培養(yǎng)液中加入無水乙醇,使培養(yǎng)液中乙醇濃度分別為0.5g/L、1.5g/L和3.0g/L；對照組在培養(yǎng)液中加入等量生理鹽水。分別處理皮質(zhì)神經(jīng)細胞30min、1h、2h、4h、8h、12h、24h。 2、通過HE染色法觀察不同濃度乙醇作用下、不同時間點原代培養(yǎng)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細胞形態(tài)的改變。 3、通過掃描電鏡觀察不同濃度乙醇作用下、不同時間點原代培養(yǎng)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細胞形態(tài)的改變。 4、采用免疫組化SP法研究不同濃度乙醇作用下、不同時間點原代培養(yǎng)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細胞CYP2E1、iNOS和NSE表達的變化。 5、統(tǒng)計分析：所有數(shù)據(jù)均用x±s表示,用SPSS12.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析,采用LSD進行兩兩比較,檢驗水準α=0.05。 結(jié)果： 1、大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細胞的原代培養(yǎng)：皮質(zhì)神經(jīng)細胞在培養(yǎng)第9d分化成熟,倒置顯微鏡下可見細胞胞體飽滿,折光性強,胞核位于細胞中央或偏于一側(cè),胞核及核仁清晰可見,細胞突起長度明顯增長,突起粗大并交織成網(wǎng)狀。 2、大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細胞的純度鑒定：NSE免疫細胞化學(xué)染色后,陰性對照可見細胞漿及突起呈淡藍色,陽性反應(yīng)可見細胞漿及突起呈棕黃色。計算出每個視野中陽性細胞數(shù)與細胞總數(shù)的平均比值為90%,即神經(jīng)細胞純度為90%。 3、乙醇作用后皮質(zhì)神經(jīng)細胞倒置顯微鏡下的表現(xiàn)：0.5g/L乙醇作用后,各時間點細胞形態(tài)改變與對照組基本相同。1.5g/L乙醇作用8h后,細胞形態(tài)發(fā)生改變,細胞呈梭形或長梭形,胞漿內(nèi)可見圓形空泡。3.0g/L乙醇作用后,隨著乙醇濃度和作用時間增加,細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,細胞腫大變圓,細胞漿內(nèi)圓形空泡增多,細胞突起變短明顯,細胞核腫大或消失,細胞問連接消失。 4、乙醇作用后皮質(zhì)神經(jīng)細胞HE染色結(jié)果：0.5g/L乙醇作用后,各時間點細胞的形態(tài)改變與對照組基本相同。1.5g/L乙醇作用8h后,細胞形態(tài)發(fā)生改變,可見細胞胞體腫大、變圓,細胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡,胞核不規(guī)則淡染。3.0g/L乙醇作用后,隨著乙醇濃度和作用時間的增加,細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,細胞腫大變圓,細胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量空泡；部分細胞胞體變小、深染、或呈三角形,細胞漿紅染加深,細胞核小而深染,核仁不明顯,細胞間連接消失。 5、乙醇作用后皮質(zhì)神經(jīng)細胞掃描電鏡觀察結(jié)果：0.5g/L乙醇作用后,各時間點細胞形態(tài)改變與對照組基本相同。1.5g/L乙醇作用8h后,細胞形態(tài)發(fā)生改變,部分細胞胞體呈梭形、長梭形或不規(guī)則形,突起變短明顯；少數(shù)細胞胞體表面的樹突棘形態(tài)發(fā)生改變,胞體局部失去與其他細胞的連接。3.0g/L乙醇作用后,隨著乙醇濃度和作用時間的增加,細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,細胞胞體腫大變圓,部分細胞呈不規(guī)則形,突起變短；隨著作用時間增加,表面呈凹陷狀、不規(guī)則形的細胞逐漸增多,突起變短明顯,部分細胞樹突棘的形態(tài)發(fā)生改變；最后大部分細胞塌陷呈平鋪狀,細胞突起消失,細胞之間的連接消失。 6、乙醇作用后皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)CYP2E1、iNOS和NSE的表達結(jié)果：(1) CYP2E1的表達結(jié)果：對照組皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)CYP2E1只有輕度表達；0.5g/L乙醇作用后皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)CYP2E1的表達稍有增強；1.5g/L乙醇作用后,皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)CYP2E1表達逐漸增強,2h時CYP2E1表達開始增強,12h時CYP2E1表達最強,24h時CYP2E1表達仍高于正常；3.0g/L乙醇作用后,皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)CYP2E1表達逐漸增強,1h時CYP2E1表達開始增強,8h時CYP2E1表達最強,隨后表達逐漸下降,24 h時CYP2E1表達仍高于正常。(2)iNOS的表達結(jié)果：對照組皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)iNOS只有極輕度表達；0.5g/L乙醇作用后皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)iNOS的表達稍有增強；1.5g/L乙醇作用后,皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)iNOS表達逐漸增強,2h時iNOS表達開始增強,12h時iNOS表達最強,隨后表達逐漸下降,24h時iNOS表達仍高于正常；3.0g/L乙醇作用后,皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)iNOS表達逐漸增強,1h時iNOS表達開始增強,8h時iNOS表達最強,隨后表達逐漸下降,24 h時iNOS表達仍高于正常。(3)NSE的表達結(jié)果：對照組皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)NSE呈強陽性表達；0.5g/L乙醇作用后皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)NSE的表達稍減弱；1.5g/L乙醇作用后,皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)NSE表達逐漸下降,2h時NSE表達開始下降,12h時NSE表達最弱；3.0g/L乙醇作用后,皮質(zhì)神經(jīng)細胞內(nèi)NSE表達下降比較快,1h時NSE表達開始下降,8h時NSE表達最弱。 結(jié)論： 1、不同濃度乙醇作用原代培養(yǎng)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細胞后,倒置顯微鏡和光鏡下發(fā)現(xiàn),中、高濃度乙醇短時間內(nèi)即能導(dǎo)致皮質(zhì)神經(jīng)細胞的形態(tài)發(fā)生改變。 2、掃描電鏡下觀察發(fā)現(xiàn),中、高濃度乙醇能對皮質(zhì)神經(jīng)細胞造成損傷,導(dǎo)致皮質(zhì)神經(jīng)細胞的形態(tài)發(fā)生改變,同時與作用時間密切相關(guān)。 3、乙醇作用皮質(zhì)神經(jīng)細胞后,CYP2E1和iNOS的表達隨著乙醇濃度和作用時間的增加而增強,而NSE的表達則逐漸下降；三者表達的時序性變化基本一致,在法醫(yī)學(xué)檢驗及鑒定中,可聯(lián)合起來推斷乙醇的作用時間。
[Abstract]:Background and purpose:
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：D919.2

【參考文獻】

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