發(fā)布時(shí)間：2017-11-22 09:08

  本文關(guān)鍵詞：基于磁性微粒純化法醫(yī)樣本DNA方法的建立

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【摘要】：眾所周知,法醫(yī)樣本的DNA純化是法醫(yī)DNA分析的關(guān)鍵技術(shù)之一。在案件偵破過程中,案發(fā)現(xiàn)場(chǎng)常會(huì)殘留各種微量物證,如微量血痕、精斑、各種衣物纖維上附著的脫落細(xì)胞等,這些微量物證的DNA檢驗(yàn)對(duì)案件的偵破均具有重要的支持作用。但由于此類疑難物證中的DNA含量極少、DNA分子受到外界環(huán)境影響易發(fā)生損傷或降解、樣本本身或在收集過程中常伴有抑制劑殘留,這些均給后續(xù)的DNA分析造成較大難度。由此可見,高質(zhì)量DNA純化技術(shù)的應(yīng)用是成功進(jìn)行法醫(yī)疑難物證DNA檢測(cè)的前提。 目前,犯罪實(shí)驗(yàn)室中主流的DNA純化技術(shù)為Chelex-100、硅膜離心柱法,其操作步驟繁瑣,純化效率、產(chǎn)物純度及完整性相對(duì)欠缺,且大多依賴于國(guó)外昂貴的試劑盒。因此,本課題以自主研發(fā)的“二氧化硅磁性微�！弊鳛楣滔噍d體,以血斑、毛囊為主要實(shí)驗(yàn)樣本,旨在建立一套高效、廉價(jià)且快捷的法醫(yī)樣本DNA純化方案。此方法利用固相純化原理,在特定條件下將DNA非特異性地結(jié)合于磁性微粒表面,形成“DNA-磁性微粒復(fù)合物”,在外加磁場(chǎng)的作用下選擇性分離,從而達(dá)到純化的目的。 研究結(jié)果表明：1)該方法能夠穩(wěn)定地從血斑樣本中純化得到較高質(zhì)量的DNA。5mm直徑的血斑,DNA純化產(chǎn)量約65ng,且完整性良好,可直接用于下游PCR反應(yīng)；批內(nèi)、批間變異系數(shù)分別為7.93%-8.78%、10.1%,與市售同類試劑盒具有可比性；亦可從微量血液、口腔拭子、煙蒂、口香糖等常見法醫(yī)檢材中分離純化DNA,適應(yīng)性廣泛。2)對(duì)上述裂解體系中的鹽成份、Ca2+及SDS終濃度做進(jìn)一步優(yōu)化,可高效地從毛囊中分離純化DNA。三根毛發(fā)的毛囊,其DNA純化產(chǎn)量約30-35ng；A260/A280比值在1.7-1.9之間,純度較高；STRs復(fù)合擴(kuò)增表明DNA分子完整性良好；亦可純化得到高質(zhì)量、完整的mtDNA。
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：D919.2

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本文編號(hào)：1214171