本文關(guān)鍵詞：基于磁性微粒純化法醫(yī)樣本DNA方法的建立

  更多相關(guān)文章： 二氧化硅磁性微粒 血斑 毛發(fā) DNA 純化

【摘要】：眾所周知,法醫(yī)樣本的DNA純化是法醫(yī)DNA分析的關(guān)鍵技術(shù)之一。在案件偵破過程中,案發(fā)現(xiàn)場常會殘留各種微量物證,如微量血痕、精斑、各種衣物纖維上附著的脫落細胞等,這些微量物證的DNA檢驗對案件的偵破均具有重要的支持作用。但由于此類疑難物證中的DNA含量極少、DNA分子受到外界環(huán)境影響易發(fā)生損傷或降解、樣本本身或在收集過程中常伴有抑制劑殘留,這些均給后續(xù)的DNA分析造成較大難度。由此可見,高質(zhì)量DNA純化技術(shù)的應(yīng)用是成功進行法醫(yī)疑難物證DNA檢測的前提。 目前,犯罪實驗室中主流的DNA純化技術(shù)為Chelex-100、硅膜離心柱法,其操作步驟繁瑣,純化效率、產(chǎn)物純度及完整性相對欠缺,且大多依賴于國外昂貴的試劑盒。因此,本課題以自主研發(fā)的“二氧化硅磁性微�！弊鳛楣滔噍d體,以血斑、毛囊為主要實驗樣本,旨在建立一套高效、廉價且快捷的法醫(yī)樣本DNA純化方案。此方法利用固相純化原理,在特定條件下將DNA非特異性地結(jié)合于磁性微粒表面,形成“DNA-磁性微粒復(fù)合物”,在外加磁場的作用下選擇性分離,從而達到純化的目的。 研究結(jié)果表明：1)該方法能夠穩(wěn)定地從血斑樣本中純化得到較高質(zhì)量的DNA。5mm直徑的血斑,DNA純化產(chǎn)量約65ng,且完整性良好,可直接用于下游PCR反應(yīng)；批內(nèi)、批間變異系數(shù)分別為7.93%-8.78%、10.1%,與市售同類試劑盒具有可比性；亦可從微量血液、口腔拭子、煙蒂、口香糖等常見法醫(yī)檢材中分離純化DNA,適應(yīng)性廣泛。2)對上述裂解體系中的鹽成份、Ca2+及SDS終濃度做進一步優(yōu)化,可高效地從毛囊中分離純化DNA。三根毛發(fā)的毛囊,其DNA純化產(chǎn)量約30-35ng；A260/A280比值在1.7-1.9之間,純度較高；STRs復(fù)合擴增表明DNA分子完整性良好；亦可純化得到高質(zhì)量、完整的mtDNA。
【學位授予單位】：西北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：D919.2

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李萬水,陳松,涂政;糞便DNA提取及檢驗[J];中國法醫(yī)學雜志;2004年04期

2 賈東濤;韓海軍;張玉紅;姚建;王林生;;陳舊骨骼DNA提取方法的應(yīng)用研究[J];中國法醫(yī)學雜志;2007年04期

3 巴華杰;馬駿;劉冰泉;朱愛華;;人類指甲在法醫(yī)學中的應(yīng)用[J];中國法醫(yī)學雜志;2010年03期

4 宣金鋒;丁梅;王保捷;龐灝;邢佳鑫;孟菁華;;FTA卡在微量血痕DNA多態(tài)性分析中的應(yīng)用[J];中國法醫(yī)學雜志;2011年03期

5 徐隆昌;易少華;黃代新;楊慶恩;;DNA甲基化及其與個體年齡相關(guān)性研究[J];中國法醫(yī)學雜志;2011年04期

6 李愛強;趙興春;張艷霞;趙麗;王華;王項華;宋金平;;生物檢材DNA堿性裂解提取法的優(yōu)化與改良[J];中國法醫(yī)學雜志;2011年04期

7 關(guān)亞卿;李淑瑾;叢斌;馬春玲;;DNA甲基化在法醫(yī)DNA分析中的應(yīng)用[J];中國法醫(yī)學雜志;2011年05期

8 葉健,季安全,趙興春,涂政,張志強,朱世峰,袁麗;燒骨DNA檢驗技術(shù)的研究[J];法醫(yī)學雜志;2004年03期

9 顧麗華;張晨;陳連康;鄭會芬;程莉;周懷谷;;激光顯微捕獲口腔上皮細胞的DNA分型[J];法醫(yī)學雜志;2006年03期

10 楊電;劉超;徐曲毅;胡慧英;劉宏;;微量口腔脫落細胞檢材的DNA檢驗[J];法醫(yī)學雜志;2008年02期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王會娟;抗腫瘤藥物在人肝微粒體中的代謝表型與相關(guān)藥物代謝酶基因型的關(guān)聯(lián)性研究[D];西北大學;2011年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王艷;線粒體DNA序列多態(tài)性及其在法醫(yī)學應(yīng)用的研究[D];山西醫(yī)科大學;2002年

2 劉志芳;CYP4502E1基因多態(tài)性及法醫(yī)學和群體遺傳學意義的研究[D];中國醫(yī)科大學;2005年

3 王文輝;精子頂體形態(tài)和功能的研究[D];安徽醫(yī)科大學;2008年

4 殷敏;磁性多壁碳納米管的功能化修飾及在磁共振成像中的應(yīng)用[D];上海師范大學;2010年

5 何瓊;MtDNA SNPs復(fù)合檢測體系建立及法醫(yī)學應(yīng)用研究[D];南方醫(yī)科大學;2010年

，

本文編號：1214171