本文關(guān)鍵詞：α-纖維蛋白原Thr312Ala基因多態(tài)性與肺動(dòng)脈栓塞法醫(yī)學(xué)鑒定的相關(guān)研究

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【摘要】：目的 通過對(duì)山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)鑒定中心已經(jīng)確診的肺動(dòng)脈栓塞尸檢甲醛固定組織提取DNA,擴(kuò)增α-纖維蛋白原Thr312Ala基因,進(jìn)行固定組織與正常對(duì)照比較分析,觀察其基因多態(tài)性,研究α-纖維蛋白原Thr312Ala基因多態(tài)性是否與肺動(dòng)脈栓塞疾病存在相關(guān)性,并初步探討其機(jī)制和在臨床醫(yī)學(xué)與法醫(yī)學(xué)鑒定中的應(yīng)用及意義。 方法 1.選取山西醫(yī)科大學(xué)司法鑒定中心不同時(shí)間段10%福爾馬林固定的心肌組織14例(選取檢材的要求均符合死亡后72小時(shí)解剖,并進(jìn)行固定的組織),每例標(biāo)本分別按三種實(shí)驗(yàn)方法取50mg。分別以改良酚-氯仿法,改良Trizol法,試劑盒法,提取DNA,進(jìn)行紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD260/OD280值后,經(jīng)PCR擴(kuò)增,瓊脂糖凝膠電泳分析來確定提取DNA質(zhì)量。 2.選取山西醫(yī)科大學(xué)司法鑒定中心2009-2012年已經(jīng)確診的肺動(dòng)脈栓塞尸檢甲醛固定組織14例(選取檢材的要求均符合死亡后72小時(shí)解剖,并進(jìn)行固定的組織),對(duì)照組56例,主要來自臨床門診體檢者和健康志愿者,既往無DVT、PE病史,與PE患者無血緣關(guān)系,無心、腦、肺、腎、血液、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病。應(yīng)用改良酚-氯仿法提取DNA,聚合酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長(zhǎng)度多態(tài)性以及瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)α-纖維蛋白原基因Thr312Ala在甲醛固定組織中的多態(tài)性。 結(jié)果 1.三種不同從甲醛固定組織中提取DNA的方法比較,改良酚-氯仿法提取的質(zhì)量最好,OD260/OD280比值為1.8415±0.3804,DNA含量為0.9438±0.5301。經(jīng)PCR擴(kuò)增,瓊脂糖凝膠電泳顯示以改良酚-氯仿法所提DNA的譜帶清晰度優(yōu)于其它兩種方法。 2.對(duì)肺動(dòng)脈栓塞病例組、正常對(duì)照組Thr312Ala基因多態(tài)性的基因型頻率及基因頻率進(jìn)行Hurdy-Weinbarg平衡(HWE)檢驗(yàn),對(duì)照組及病例組均具有群體代表性(P0.05)。各基因型在肺動(dòng)脈栓塞(PE)組與對(duì)照組比較(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各等位基因在PE組與對(duì)照組比較(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,并且A等位基因與PE呈負(fù)相關(guān)(RR=0.475,P0.05),G等位基因與PE呈正相關(guān)(RR=5.818,P0.05)。 結(jié)論 本研究在應(yīng)用三種不同提取方法下,證實(shí)改良酚-氯仿法簡(jiǎn)便有效,提取質(zhì)量最高,并應(yīng)用其方法成功提取肺動(dòng)脈栓塞甲醛固定組織DNA。對(duì)尸檢肺動(dòng)脈栓塞甲醛固定心肌組織和正常對(duì)照組健康人群外周血進(jìn)行比較,研究發(fā)現(xiàn),α-纖維蛋白原基因Thr312Ala的多態(tài)性位點(diǎn)G等位基因與肺動(dòng)脈栓塞疾病呈正關(guān)聯(lián),其基因突變更容易促使肺動(dòng)脈栓塞的發(fā)生,這種作用可能是通過影響血漿纖維蛋白原水平的途徑來實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：D919.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1153108