發(fā)布時間：2017-10-28 11:26

  本文關(guān)鍵詞：氯氮平及其代謝物的死后分布及死后彌散研究

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【摘要】：目的 1.建立血液、尿液及組織中氯氮平(Clozapine, CLP)及主要代謝物去甲氯氮平(demethylclozapine, DMCLP)、氯氮平氮氧化物(N-oxidation-clozapine, CLP-NO)的固相萃取/液相色譜-質(zhì)譜(SPE-LC/MS)的檢測方法。 2.研究CLP及其代謝物死后分布及死后彌散規(guī)律,為氯氮平中毒死亡案件的法醫(yī)學(xué)鑒定提供實驗依據(jù)。 方法 1.氯氮平及其代謝物的SPE和LC/MS/MS分析：對檢材預(yù)處理后,采用OASIS(?)HLB3cc(60mg)固相萃取小柱對檢材進行提取凈化,采用Agilent(?)XDB-C18液相柱(4.6mm×150mm×3.5um)作為液相色譜柱,進行LC/MS/MS檢測。 2.死后分布：新西蘭大白兔6只,雄性,隔夜禁食,隨機分成兩組,用氯氮平分別以LDso劑量(270mg/kg)與4LDso劑量(1080mg/kg)給實驗動物(新西蘭大白兔)灌胃,待實驗動物心跳呼吸等生命體征全部消失后,迅速解剖動物,提取心血、尿、腦、心、肝、脾、肺、’腎等檢材,冷凍保存,經(jīng)固相萃取后,LC/MS/MS定性定量檢測其中CLP及其代謝物(DMCLP和CLP-NO)的含量,定性檢測葡萄糖醛酸氯氮平(CLP-G)。 3.死后彌散：新西蘭大白兔33只,雄性,隔夜禁食,隨機分為死后彌散組(15只),溫度影響組(6只),劑量影響組(6只)和灌胃時間影響組(6只)。 死后彌散組：將新西蘭大白兔固定于兔臺上,夾閉氣管處死,死后1h以LD50(270mg/kg)劑量CLP給實驗動物(新西蘭大白兔)灌胃染毒,染毒后實驗動物置于常溫條件下,分別于0.5d,1d,2d,4d,6d各解剖3只實驗動物,提取腦、心、肺、肝、腎、右下肢、玻璃體液、心血、尿、膽汁,-20℃保存,經(jīng)固相萃取后,LC-MS/MS定性定量檢測其中CLP及其代謝物(DMCLP和CLP-NO)含量,定性檢測葡萄糖醛酸氯氮平(CLP-G)。 溫度影響組：將新西蘭大白兔固定在兔臺上,夾閉氣管處死,死后1h以LD50(270mg/kg)劑量CLP給實驗動物(新西蘭大白兔)灌胃染毒,將染毒后實驗動物各三只分別置于-20℃,4℃及常溫條件下保存,4d后全部解剖,提取腦、心、肺、肝、腎、右下肢、玻璃體液、心血、尿、膽汁,檢材于-20℃保存,經(jīng)固相萃取后,LC-MS/MS定性定量檢測其中CLP及其代謝物(DMCLP和CLP-NO)含量,定性檢測葡萄糖醛酸氯氮平(CLP-G)。 劑量影響組：將新西蘭大白兔固定在兔臺上,夾閉氣管處死,死后1h分別以1/2LD50(135mg/kg)、LD50(270mg/kg)劑量CLP給實驗動物(新西蘭大白兔)灌胃染毒,將染毒后實驗動物置于常溫條件下,4d后解剖,提取腦、心、肺、肝、腎、右下肢、玻璃體液、心血、尿、膽汁,檢材于-20℃保存,后經(jīng)固相萃取,LC-MS/MS定性定量檢測其中CLP及其代謝物(DMCLP和CLP-NO)含量,定性檢測葡萄糖醛酸氯氮平(CLP-G)。 灌胃時間影響組：將新西蘭大白兔固定在兔臺上,夾閉氣管處死,于死后1h、3h、6h分別以LD50(270mg/kg)劑量CLP給實驗動物(新西蘭大白兔)灌胃染毒,將染毒后實驗動物置于常溫條件下,4d后解剖,提取腦、心、肺、肝、腎、右下肢、玻璃體液、心血、尿、膽汁,檢材于-20℃保存,經(jīng)固相萃取后,LC-MS/MS定性定量檢測其中CLP及其代謝物(DMCLP和CLP-NO)含量,定性檢測葡萄糖醛酸氯氮平(CLP-G)。 4.采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件處理實驗數(shù)據(jù),結(jié)果以x±S表示。 結(jié)果 1.氯氮平及其代謝物SPE-LC/MS/MS分析 ①采用Agilent(?)DB-C18(4.6mm×150mm×3.5um)液相柱,前接phenomenex保護柱(DIKMA公司,美國)作為液相色譜柱,目標(biāo)物出峰最宜；血、尿及組織樣品中加入適量2.5moL/L碳酸鈉調(diào)PH至11時目標(biāo)物回收率最佳；采用OASIS(?)HLB3cc(60mg)柱固相萃取進行提取,較液液萃取(乙酸乙酯)提取回收率高。 ②液相色譜/質(zhì)譜檢驗(LC/MS):使用電噴霧正離子源(+),采用多反應(yīng)監(jiān)測MRM掃描方式,MRM監(jiān)測各組分離子對進行定性,氯氮平的定量離子對(327/192),去甲氯氮平(313/270.2),氯氮平-N-氧化物(343/243.1),葡萄糖醛酸氯氮平(503/327),安定(313/154.1),尿液中CLP、DCLP、CLP-NO的線性檢測范圍為5或10-1000ng/mL,最低檢測濃度分別為5或10ng/mL;血液中CLP、DCLP、CLP-NO的線性檢測范圍為2或5-1000ng/mL,最低檢測濃度為2或5ng/mL;肝中CLP、DCLP、CLP-NO的線性檢測范圍為50-1000ng/mL,最低檢測濃度為50ng/mL。 2.死后分布 LD50組及4LD50組染毒致死家兔體液和組織中均檢出CLP、DMCLP和CLP-NO,尿液中均檢出CLP-G,其余組織和體液中未檢出CLP-G。 LD50灌胃組：CLP含量從高到低分別為：肺肝、腎、腦、脾膽汁、心肌、心血尿、玻璃體液、下肢肌；DMCLP在各臟器的含量從高到低分別為肺、肝腎、腦、脾膽汁、心肌、心血、尿、玻璃體液下肢��；CLP-NO在各臟器的含量從高到低分別為肺、肝腎、腦、脾膽汁、心肌、心血、尿、玻璃體液、下肢肌。 4LD50灌胃組：CLP含量從高到低分別為：肺、肝腎、腦、脾膽汁、心肌心血、尿、玻璃體液、下肢�。籇MCLP含量從高到低分別為肺、肝腎、腦、脾心肌、膽汁、心血、尿、玻璃體液下肢�。籆LP-NO含量從高到低分別為肺、肝腎、腦、心肌脾、膽汁、心血、玻璃體液、尿下肢肌。 3.死后彌散 死后彌散動物模型中,所有檢材中均未檢出氯氮平代謝物。 死后彌散組：LD50染毒家兔死后常溫保存時,0.5d后心肌、心血、肺、肝、腎均檢CLP,1d后腦、下肢肌中也檢測出CLP,2d后膽汁也檢出CLP,玻璃體及尿液一直未檢出CLP。 溫度影響組：-20℃組肝、脾、肺中均檢出CLP,其余均未檢出CLP；4℃組心、肝、脾、肺、腎、腦均檢出CLP；常溫組除尿、玻璃體液未檢出CLP外,其余均檢出CLP。 劑量影響組：1/2LD50、LD50、2LD50三種劑量下,尿、下肢肌均未檢出CLP,心肌中CLP的濃度隨著灌胃藥物濃度的增大而增大。 灌胃時間影響組：1h組尿、玻璃體液中未檢出CLP;3h組尿、玻璃體液、下肢肌中未檢出CLP;6h組尿、玻璃體液、下肢肌、心、腎中未檢出CLP,各組其余組織和體液中均檢出CLP。 結(jié)論 1.本文建立同時測定生物檢材中CLP、CLP、DMCLP和CLP-NO定性、定量及CLP-G定性的SPE-LC/MS/MS檢測法,回收率高,重現(xiàn)性好,特異性高,靈敏度高,適用于臨床中毒的快速檢驗和法醫(yī)中毒案件的檢驗。 2.CLP及其代謝物在染毒致死家兔體內(nèi)分布不均勻。LD50組及4LD50組染毒致死家兔體液和組織中均檢出CLP、DMCLP和CLP-NO,尿液中均檢出CLP-G,其余組織和體液中未檢出CLP-G。 3.本實驗再次證明CLP在家兔體內(nèi)可發(fā)生死后彌散,保存時間、保存溫度和灌胃時間可影響其死后彌散,同時發(fā)現(xiàn)6d內(nèi)所有死后染毒家兔體內(nèi)均未檢出CLP的代謝物DMCLPCLP-NO和CLP-G。 4.比較CLP及其代謝物的死后分布和死后彌散結(jié)果提示, DMCLP、 CLP-NO、CLP-G可能成為CLP生前服藥的標(biāo)志物,尿中檢出CLP-G可能成為CLP中毒(死)案件法醫(yī)學(xué)鑒定中生前服毒和死后染毒鑒別的依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：氯氮平 去甲氯氮平 氯氮平-N-氧化物 LC-MS/MS 死后分布 死后彌散
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：D919.4
【目錄】：

• 目錄4-5
• 中文摘要5-9
• Abstract9-14
• 前言14-18
• 第一部分 氯氮平及其代謝物的HPLC/MS/MS檢測18-28
• 1 材料與方法18-20
• 2 結(jié)果20-28
• 第二部分 氯氮平及其代謝物的死后分布研究28-35
• 1 材料28
• 2 方法28-29
• 3 結(jié)果29-35
• 第三部分 氯氮平及其代謝物的彌散研究35-39
• 1 材料35
• 2 方法35-36
• 3 結(jié)果36-39
• 討論39-42
• 小結(jié)42-43
• 參考文獻43-48
• 綜述48-55
• 參考文獻52-55
• 中英文對照表55-56
• 個人簡介56-57
• 攻讀學(xué)位期間論文發(fā)表情況57-58
• 致謝58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王琦瑋;莫耀南;周海梅;李樸;馬錦琦;劉良;;固相微萃取-氣相色譜質(zhì)譜法測定血漿中的氯氮平濃度[J];中國法醫(yī)學(xué)雜志;2007年02期

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本文編號：1108066