槐糖脂（Sophorolipids,SL）作為一種糖脂類生物表面活性劑,毒性低,可降解,且環(huán)境兼容性較好,廣泛應用于石油、環(huán)保、醫(yī)藥和食品等領域。槐糖脂不僅具備良好的乳化、分散和增溶等理化特性,且一些特殊類型的槐糖脂所具有抗菌、抗炎和抗腫瘤等生物活性,這使其在醫(yī)藥領域更具研究價值。然而,槐糖脂并沒有如其表現(xiàn)出來的優(yōu)勢那樣投入到大規(guī)模的工業(yè)生產和應用中去。相對于化學表面活性劑,槐糖脂的生產成本相對較高,且槐糖脂產物中成分較為復雜,導致其終產物所具有的物理化學特性依賴于不同類型槐糖脂的組成比例,而這兩個因素已成為限制槐糖脂應用的最主要障礙。為了解決槐糖脂產物多樣性的問題,本研究利用畢赤酵母（Pichia pastoris）GS115對球擬假絲酵母Candida bombicola ATCC 22214中的內酯型槐糖脂合成途徑中的關鍵酶——內酯化酶進行異源表達,并將酶應用于體外催化,將酸型槐糖脂轉化為更具藥用價值的內酯型槐糖脂。在優(yōu)化酶的誘導表達條件后,以硫酸銨沉淀及His標簽親和層析對酶純化獲得純度較高的內酯化酶。對純化后的酶進行相關酶學性質表征,并測定其體外催化酸型槐糖脂內酯化反應的模式及...

【文章頁數】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1.1 槐糖脂簡介
        1.1.1 生物表面活性劑
        1.1.2 槐糖脂的結構及性質
    1.2 槐糖脂的應用
        1.2.1 石油開采應用
        1.2.2 在食品工業(yè)中的應用
        1.2.3 在環(huán)境保護中的應用
        1.2.4 在醫(yī)藥行業(yè)的應用
    1.3 槐糖脂的生物合成
        1.3.1 槐糖脂的合成途徑
        1.3.2 槐糖脂合成所需的特異性酶
    1.4 內酯化酶的研究進展
        1.4.1 內酯化酶的來源
        1.4.2 內酯化酶的結構與性質
    1.5 槐糖脂廉價底物生產的研究進展
        1.5.1 國外的研究進展
        1.5.2 國內的研究進展
    1.6 木質纖維素生物煉制的工藝
        1.6.1 預處理工藝
        1.6.2 水解工藝
        1.6.3 脫毒工藝
    1.7 影響槐糖脂產量的發(fā)酵參數
        1.7.1 發(fā)酵溫度
        1.7.2 發(fā)酵液pH
        1.7.3 溶氧
        1.7.4 發(fā)酵時間
    1.8 研究目的及意義
    1.9 技術路線
第二章 內酯化酶的異源表達及酶學性質研究
    引言
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株和質粒
        2.1.2 工具酶及試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 溶液和培養(yǎng)基
    2.2 實驗方法
        2.2.1 內酯化酶基因的克隆
        2.2.2 內酯化酶基因重組表達載體的構建
        2.2.3 重組表達載體的氯化鋰轉化
        2.2.4 重組畢赤酵母的篩選和鑒定
        2.2.5 重組畢赤酵母的誘導表達
        2.2.6 內酯化酶蛋白的純化
    2.3 分析方法
        2.3.1 生物量測定
        2.3.2 內酯化酶蛋白的SDS-PAGE分析
        2.3.3 內酯化酶的酶活力測定
        2.3.4 內酯化酶的酶學性質研究
    2.4 結果與分析
        2.4.1 BCA法測蛋白濃度的標準曲線繪制
        2.4.2 內酯化酶基因克隆載體的構建
        2.4.3 pPICZαB-CBLE表達載體的構建
        2.4.4 重組畢赤酵母GS115/pPICZαB-CBLE的篩選和鑒定
        2.4.5 誘導溫度對GS115/ pPICZαB-CBLE產酶的影響
        2.4.6 起始誘導菌體量對GS115/ pPICZαB-CBLE產酶的影響
        2.4.7 甲醇濃度對GS115/ pPICZαB-CBLE產酶的影響
        2.4.8 誘導時間對GS115/ pPICZαB-CBLE產酶的影響
        2.4.9 pH對內酯化酶酶活力和穩(wěn)定性的影響
        2.4.10 溫度對內酯化酶酶活力和熱穩(wěn)定性的影響
        2.4.11 金屬離子和EDTA對內酯化酶酶活力的影響
    2.5 討論
    2.6 本章小結
第三章 玉米秸稈發(fā)酵生產槐糖脂的研究
    引言
    3.1 實驗材料
        3.1.1 材料和試劑
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法
    3.2 實驗方法
        3.2.1 玉米秸稈水解液的制備
        3.2.2 水解液的脫毒
        3.2.3 水解液發(fā)酵生產槐糖脂條件的探究
    3.3 檢測方法
        3.3.1 纖維素酶酶活的測定
        3.3.2 葡萄糖含量的檢測
        3.3.3 水解液脫毒效果的檢測
        3.3.4 槐糖脂產量的測定
    3.4 結果與分析
        3.4.1 C.bombicola生長曲線的繪制
        3.4.2 葡萄糖標準曲線的繪制
        3.4.3 酶解葡萄糖含量的測定
        3.4.4 活性炭添加量對水解液脫毒效果的影響
        3.4.5 處理溫度和處理時間對水解液脫毒效果的影響
        3.4.6 水解液脫毒效果的評價
        3.4.7 疏水碳源對槐糖脂產量的影響
        3.4.8 氮源對槐糖脂產量的影響
        3.4.9 金屬離子對槐糖脂產量的影響
        3.4.10 初始pH對槐糖脂產量的影響
        3.4.11 發(fā)酵溫度對槐糖脂產量的影響
    3.5 討論
    3.6 本章小結
結論
參考文獻
個人簡介
致謝



本文編號：4043178