槐糖脂（Sophorolipids,SL）作為一種糖脂類生物表面活性劑,毒性低,可降解,且環(huán)境兼容性較好,廣泛應(yīng)用于石油、環(huán)保、醫(yī)藥和食品等領(lǐng)域�；碧侵粌H具備良好的乳化、分散和增溶等理化特性,且一些特殊類型的槐糖脂所具有抗菌、抗炎和抗腫瘤等生物活性,這使其在醫(yī)藥領(lǐng)域更具研究價(jià)值。然而,槐糖脂并沒有如其表現(xiàn)出來的優(yōu)勢那樣投入到大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)和應(yīng)用中去。相對于化學(xué)表面活性劑,槐糖脂的生產(chǎn)成本相對較高,且槐糖脂產(chǎn)物中成分較為復(fù)雜,導(dǎo)致其終產(chǎn)物所具有的物理化學(xué)特性依賴于不同類型槐糖脂的組成比例,而這兩個(gè)因素已成為限制槐糖脂應(yīng)用的最主要障礙。為了解決槐糖脂產(chǎn)物多樣性的問題,本研究利用畢赤酵母（Pichia pastoris）GS115對球擬假絲酵母Candida bombicola ATCC 22214中的內(nèi)酯型槐糖脂合成途徑中的關(guān)鍵酶——內(nèi)酯化酶進(jìn)行異源表達(dá),并將酶應(yīng)用于體外催化,將酸型槐糖脂轉(zhuǎn)化為更具藥用價(jià)值的內(nèi)酯型槐糖脂。在優(yōu)化酶的誘導(dǎo)表達(dá)條件后,以硫酸銨沉淀及His標(biāo)簽親和層析對酶純化獲得純度較高的內(nèi)酯化酶。對純化后的酶進(jìn)行相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)表征,并測定其體外催化酸型槐糖脂內(nèi)酯化反應(yīng)的模式及...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 槐糖脂簡介
        1.1.1 生物表面活性劑
        1.1.2 槐糖脂的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)
    1.2 槐糖脂的應(yīng)用
        1.2.1 石油開采應(yīng)用
        1.2.2 在食品工業(yè)中的應(yīng)用
        1.2.3 在環(huán)境保護(hù)中的應(yīng)用
        1.2.4 在醫(yī)藥行業(yè)的應(yīng)用
    1.3 槐糖脂的生物合成
        1.3.1 槐糖脂的合成途徑
        1.3.2 槐糖脂合成所需的特異性酶
    1.4 內(nèi)酯化酶的研究進(jìn)展
        1.4.1 內(nèi)酯化酶的來源
        1.4.2 內(nèi)酯化酶的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)
    1.5 槐糖脂廉價(jià)底物生產(chǎn)的研究進(jìn)展
        1.5.1 國外的研究進(jìn)展
        1.5.2 國內(nèi)的研究進(jìn)展
    1.6 木質(zhì)纖維素生物煉制的工藝
        1.6.1 預(yù)處理工藝
        1.6.2 水解工藝
        1.6.3 脫毒工藝
    1.7 影響槐糖脂產(chǎn)量的發(fā)酵參數(shù)
        1.7.1 發(fā)酵溫度
        1.7.2 發(fā)酵液pH
        1.7.3 溶氧
        1.7.4 發(fā)酵時(shí)間
    1.8 研究目的及意義
    1.9 技術(shù)路線
第二章 內(nèi)酯化酶的異源表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)研究
    引言
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 工具酶及試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 溶液和培養(yǎng)基
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 內(nèi)酯化酶基因的克隆
        2.2.2 內(nèi)酯化酶基因重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.3 重組表達(dá)載體的氯化鋰轉(zhuǎn)化
        2.2.4 重組畢赤酵母的篩選和鑒定
        2.2.5 重組畢赤酵母的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.6 內(nèi)酯化酶蛋白的純化
    2.3 分析方法
        2.3.1 生物量測定
        2.3.2 內(nèi)酯化酶蛋白的SDS-PAGE分析
        2.3.3 內(nèi)酯化酶的酶活力測定
        2.3.4 內(nèi)酯化酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 BCA法測蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
        2.4.2 內(nèi)酯化酶基因克隆載體的構(gòu)建
        2.4.3 pPICZαB-CBLE表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.4.4 重組畢赤酵母GS115/pPICZαB-CBLE的篩選和鑒定
        2.4.5 誘導(dǎo)溫度對GS115/ pPICZαB-CBLE產(chǎn)酶的影響
        2.4.6 起始誘導(dǎo)菌體量對GS115/ pPICZαB-CBLE產(chǎn)酶的影響
        2.4.7 甲醇濃度對GS115/ pPICZαB-CBLE產(chǎn)酶的影響
        2.4.8 誘導(dǎo)時(shí)間對GS115/ pPICZαB-CBLE產(chǎn)酶的影響
        2.4.9 pH對內(nèi)酯化酶酶活力和穩(wěn)定性的影響
        2.4.10 溫度對內(nèi)酯化酶酶活力和熱穩(wěn)定性的影響
        2.4.11 金屬離子和EDTA對內(nèi)酯化酶酶活力的影響
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第三章 玉米秸稈發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂的研究
    引言
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 材料和試劑
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 玉米秸稈水解液的制備
        3.2.2 水解液的脫毒
        3.2.3 水解液發(fā)酵生產(chǎn)槐糖脂條件的探究
    3.3 檢測方法
        3.3.1 纖維素酶酶活的測定
        3.3.2 葡萄糖含量的檢測
        3.3.3 水解液脫毒效果的檢測
        3.3.4 槐糖脂產(chǎn)量的測定
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 C.bombicola生長曲線的繪制
        3.4.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        3.4.3 酶解葡萄糖含量的測定
        3.4.4 活性炭添加量對水解液脫毒效果的影響
        3.4.5 處理溫度和處理時(shí)間對水解液脫毒效果的影響
        3.4.6 水解液脫毒效果的評價(jià)
        3.4.7 疏水碳源對槐糖脂產(chǎn)量的影響
        3.4.8 氮源對槐糖脂產(chǎn)量的影響
        3.4.9 金屬離子對槐糖脂產(chǎn)量的影響
        3.4.10 初始pH對槐糖脂產(chǎn)量的影響
        3.4.11 發(fā)酵溫度對槐糖脂產(chǎn)量的影響
    3.5 討論
    3.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡介
致謝



本文編號：4043178