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mcrA基因的克隆及其在分析沼氣池產(chǎn)甲烷菌多樣性中的應(yīng)用研究

發(fā)布時間:2020-12-08 03:31
  產(chǎn)甲烷菌是嚴(yán)格厭氧菌,利用傳統(tǒng)微生物學(xué)研究方法對其進行研究費時費力,而近代發(fā)展起來的現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù),則避免了這些缺點和不足,F(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)以其獨特的優(yōu)勢在環(huán)境微生物的研究中發(fā)揮著越來越重要的作用。本實驗改進了沼氣池微生物總DNA的提取方法,經(jīng)過檢驗,可滿足本研究的需要。本研究通過對產(chǎn)甲烷菌特有mcrA基因的RFLP分析、mcrA基因的熒光定量分析以及16S rDNA的DGGE分析等分子生物學(xué)方法對農(nóng)村戶用沼氣池中的產(chǎn)甲烷菌群落結(jié)構(gòu)和數(shù)量進行了研究。首先擴增了沼氣池中產(chǎn)甲烷菌甲基輔酶M還原酶α亞基(mcrA)基因片段,建立產(chǎn)甲烷菌mcrA基因文庫,對陽性克隆用限制性內(nèi)切酶PstⅠ進行RFLP分析,酶切后1、2、3、4號沼氣池分別得到3、4、4、2種OTU(operational taxonomic unit),從每一類型OTU中選取1-2個單克隆測序后進行系統(tǒng)進化分析。結(jié)果表明,農(nóng)村戶用沼氣池中存在不同的產(chǎn)甲烷菌類群,1號沼氣池中主要有Methanogenium、Methanocorpusculum和Methanosarcina;2號池中有Methanogenium、Methan... 

【文章來源】:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】:61 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

mcrA基因的克隆及其在分析沼氣池產(chǎn)甲烷菌多樣性中的應(yīng)用研究


輔酶M和甲基化合物到甲基輔酶M的轉(zhuǎn)變A:輔酶M到甲基輔酶M的轉(zhuǎn)變

電泳圖,電泳圖,實驗分析,產(chǎn)物


從后續(xù)的實驗分析來看可以滿足實驗的需求,如圖3.3 所示。3.3.4 DGGE 分析回收后的 PCR 產(chǎn)物按照 3.2.4 的操作進行 DGGE 分析,如圖 3.4 所示。圖 3.3 回收后的 16S rDNA 電泳圖Fig 3..3 Photograph of 16S rDNA after gel extractionM: 100bp DNA maker

沼氣池,甲烷菌,圖譜


.4 不同沼氣池中產(chǎn)甲烷菌 16S rDNA 的 DGGE 圖譜ngerprint of 16S rDNA of the methanogen in different biogapresent the samples of No.1-4 biogas digester respectively.

【參考文獻】:
期刊論文
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[7]一株近海沉積物中產(chǎn)甲烷菌的分離及鑒定[J]. 仇天雷,承磊,羅輝,張輝,吳曉磊,鄧宇.  中國沼氣. 2007(02)
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本文編號:2904380

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