目的:MORC2是Microrchidia家族CW型鋅指蛋白(MORC)家族成員之一。MORC家族在進化上高度保守,并因其在抑制轉(zhuǎn)錄、表觀遺傳調(diào)控和DNA損傷修復(fù)等方面的重要功能引起人們的廣泛關(guān)注。MORC2蛋白是一種普遍表達的蛋白,結(jié)構(gòu)上主要包含ATPase域,CW鋅指型結(jié)構(gòu)域,核定位信號和卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域四個部分,分子量約為117kD。它在染色質(zhì)重塑、DNA損傷修復(fù)和脂肪生成以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。MORC2主要定位于細胞核,但在細胞質(zhì)中也有少量分布,有研究表明MORC2在細胞質(zhì)的定位是脂質(zhì)代謝和體內(nèi)平衡的關(guān)鍵參與者,能夠調(diào)節(jié)細胞質(zhì)中脂肪細胞分化和脂肪生成。而研究表明蛋白的核質(zhì)分布的改變往往伴隨著結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能的轉(zhuǎn)變。C2C12細胞是由C3H小鼠骨骼肌衛(wèi)星細胞永生化而來的細胞株,屬于小鼠的骨骼肌干細胞。該細胞具有與骨骼肌前祖細胞相同的生物學(xué)行為,且其細胞特性和形態(tài)均一,可無限傳代培養(yǎng)。C2C12細胞在2%馬血清培養(yǎng)條件下具有單向分化為肌細胞的能力,同時能夠表達MyoD、myogenin、myosin等成熟骨骼肌的多種標(biāo)志蛋白。因而在肌細胞發(fā)育分化研究中,常常把它視為實驗...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞來源
        2.1.2 主要試劑及藥品
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.2 包裝慢病毒
        2.2.3 C2C12細胞感染、穩(wěn)定株篩選及鑒定
        2.2.4 C2C12細胞誘導(dǎo)分化
        2.2.5 RNA水平的檢測
        2.2.6 蛋白水平檢測
        2.2.7 細胞形態(tài)學(xué)分析
        2.2.8 細胞免疫熒光
        2.2.9 流式周期法檢測細胞周期
        2.2.10 統(tǒng)計學(xué)方法
3 結(jié)果
    3.1 重組質(zhì)粒 Ubi-MCS-Flag-cherry-MORC2 的鑒定
    3.2 構(gòu)建 C2C12 細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)過表達 MORC2 細胞系
    3.3 過表達MORC2對C2C12 細胞分化和增殖能力的影響
    3.4 MORC2對肌分化標(biāo)志物表達的影響
    3.5 MORC2 對分化抑制因子Id3 表達的影響
    3.6 在誘導(dǎo)分化過程中MORC2發(fā)生了細胞定位的改變
    3.7 在誘導(dǎo)分化過程中Id3和Myo D的細胞分布
    3.8 細胞核漿分離檢測MORC2、I對以及Myo D表達變化
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號：3946888