為了適應(yīng)外界壓力,細菌或古菌往往會通過水平轉(zhuǎn)移的方式獲取外源基因。與此同時,細菌或古菌也需要防止外源有害基因入侵,為此,它們進化出了CRISPR-Cas系統(tǒng)介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫機制。CRISPR-Cas系統(tǒng)可以特異性高效地切割外源侵入的DNA。目前對CRISPR-Cas系統(tǒng)作用機制的研究較為透徹,但對其調(diào)控機制的了解并不深入。文獻報道大腸桿菌中存在I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng),類組蛋白H-NS抑制CRISPR-Cas系統(tǒng),但其同源蛋白Stp A對大腸桿菌CRISPR-Cas系統(tǒng)的調(diào)控尚未有報道。本文主要探究Stp A對I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)的調(diào)控機制。首先,本論文建立了檢測cas啟動子活性的熒光報告體系和檢測CRISPR-Cas系統(tǒng)切割靶標(biāo)DNA功能的實驗體系,發(fā)現(xiàn)在hns缺失的情況下Stp A可以激活cas啟動子,促進cr RNA含量的增加,從而增強I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)切割靶標(biāo)質(zhì)粒的能力。其次,為了鑒定H-NS和Stp A在cas啟動子上的結(jié)合位點,本論文通過突變預(yù)測的H-NS結(jié)合位點,證實H-NS的確通過與該位點結(jié)合抑制cas操縱子轉(zhuǎn)錄,Stp A通過結(jié)合H-...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1CRISPR-Cas系統(tǒng)Class1和Class2的結(jié)構(gòu)圖[24]

低常═ypeI、Ⅲ、Ⅳ）通過由多個與核酸酶結(jié)合的亞基組成的crRNA結(jié)合級聯(lián)復(fù)合物；Class2系統(tǒng)（TypeⅡ、Ⅴ、Ⅵ）通過單個多域蛋白負責(zé)指導(dǎo)結(jié)合和靶向切割DNA[20]，見圖1-1。在不同CRISPR-Cas系統(tǒng)中，負責(zé)適應(yīng)過程的蛋白是高度保守的，所有系統(tǒng)均需要Cas1和C....

圖1-2I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖[26]

類組蛋白StpA對大腸桿菌I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)調(diào)控機制研究3I型CRISPR-Cas系統(tǒng)主要由CRISPR陣列和切割相關(guān)的蛋白組成。在大腸桿菌K12系列菌株中，存在-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)。Ⅰ-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)主要由CRISPR陣列和8個蛋白組成，其....

圖1-3CRISPR-Cas系統(tǒng)的防御機制[39]

類組蛋白StpA對大腸桿菌I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)調(diào)控機制研究5圖1-3CRISPR-Cas系統(tǒng)的防御機制[39]Figure1-3DefensemechanismoftheCRISPR-Cassystem[39]當(dāng)CRISPR-Cas系統(tǒng)處于適應(yīng)階段時（見圖1-4）[2....

圖1-4外源DNA整合至間隔區(qū)的過程[42]

浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文6圖1-4外源DNA整合至間隔區(qū)的過程[42]Figure1-4IntegrationofforeignDNAintothespacer[42]適應(yīng)階段分為兩種類型[43]：原始態(tài)適應(yīng)（naveadaption）；始發(fā)態(tài)適應(yīng)（primedadaption）....

本文編號：3911364