發(fā)布時(shí)間：2024-02-26 04:56

　　為了適應(yīng)外界壓力,細(xì)菌或古菌往往會(huì)通過(guò)水平轉(zhuǎn)移的方式獲取外源基因。與此同時(shí),細(xì)菌或古菌也需要防止外源有害基因入侵,為此,它們進(jìn)化出了CRISPR-Cas系統(tǒng)介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫機(jī)制。CRISPR-Cas系統(tǒng)可以特異性高效地切割外源侵入的DNA。目前對(duì)CRISPR-Cas系統(tǒng)作用機(jī)制的研究較為透徹,但對(duì)其調(diào)控機(jī)制的了解并不深入。文獻(xiàn)報(bào)道大腸桿菌中存在I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng),類組蛋白H-NS抑制CRISPR-Cas系統(tǒng),但其同源蛋白Stp A對(duì)大腸桿菌CRISPR-Cas系統(tǒng)的調(diào)控尚未有報(bào)道。本文主要探究Stp A對(duì)I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)的調(diào)控機(jī)制。首先,本論文建立了檢測(cè)cas啟動(dòng)子活性的熒光報(bào)告體系和檢測(cè)CRISPR-Cas系統(tǒng)切割靶標(biāo)DNA功能的實(shí)驗(yàn)體系,發(fā)現(xiàn)在hns缺失的情況下Stp A可以激活cas啟動(dòng)子,促進(jìn)cr RNA含量的增加,從而增強(qiáng)I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)切割靶標(biāo)質(zhì)粒的能力。其次,為了鑒定H-NS和Stp A在cas啟動(dòng)子上的結(jié)合位點(diǎn),本論文通過(guò)突變預(yù)測(cè)的H-NS結(jié)合位點(diǎn),證實(shí)H-NS的確通過(guò)與該位點(diǎn)結(jié)合抑制cas操縱子轉(zhuǎn)錄,Stp A通過(guò)結(jié)合H-...

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1CRISPR-Cas系統(tǒng)Class1和Class2的結(jié)構(gòu)圖[24]

低常═ypeI、Ⅲ、Ⅳ）通過(guò)由多個(gè)與核酸酶結(jié)合的亞基組成的crRNA結(jié)合級(jí)聯(lián)復(fù)合物；Class2系統(tǒng)（TypeⅡ、Ⅴ、Ⅵ）通過(guò)單個(gè)多域蛋白負(fù)責(zé)指導(dǎo)結(jié)合和靶向切割DNA[20]，見圖1-1。在不同CRISPR-Cas系統(tǒng)中，負(fù)責(zé)適應(yīng)過(guò)程的蛋白是高度保守的，所有系統(tǒng)均需要Cas1和C....

圖1-2I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)結(jié)構(gòu)示意圖[26]

類組蛋白StpA對(duì)大腸桿菌I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)調(diào)控機(jī)制研究3I型CRISPR-Cas系統(tǒng)主要由CRISPR陣列和切割相關(guān)的蛋白組成。在大腸桿菌K12系列菌株中，存在-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)。Ⅰ-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)主要由CRISPR陣列和8個(gè)蛋白組成，其....

圖1-3CRISPR-Cas系統(tǒng)的防御機(jī)制[39]

類組蛋白StpA對(duì)大腸桿菌I-E型CRISPR-Cas系統(tǒng)調(diào)控機(jī)制研究5圖1-3CRISPR-Cas系統(tǒng)的防御機(jī)制[39]Figure1-3DefensemechanismoftheCRISPR-Cassystem[39]當(dāng)CRISPR-Cas系統(tǒng)處于適應(yīng)階段時(shí)（見圖1-4）[2....

圖1-4外源DNA整合至間隔區(qū)的過(guò)程[42]

浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文6圖1-4外源DNA整合至間隔區(qū)的過(guò)程[42]Figure1-4IntegrationofforeignDNAintothespacer[42]適應(yīng)階段分為兩種類型[43]：原始態(tài)適應(yīng)（naveadaption）；始發(fā)態(tài)適應(yīng)（primedadaption）....

本文編號(hào)：3911364