將構(gòu)建好的植物過表達(dá)載體pCAMBIA3301-Gmr937和RNAi表達(dá)載體pCAMBIA3301-Gmr937-RNAi,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法將植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)入煙草。經(jīng)PCR檢測得到T₁代過表達(dá)載體陽性植株13株,RNAi表達(dá)陽性植株11株。對陽性植株進(jìn)行熒光定量PCR,測定目的基因的表達(dá)量。結(jié)果表明:正常條件下,Gmr937基因在轉(zhuǎn)化煙草根、葉片中表達(dá)量較高,在莖中表達(dá)量較低;轉(zhuǎn)干擾表達(dá)植株目的基因在根、葉片中表達(dá)量是對照0.8倍,在莖中的表達(dá)量是對照的0.85倍。干旱條件下,轉(zhuǎn)Gmr937超表達(dá)載體煙草在葉片中表達(dá)量是對照組的14倍,在根中表達(dá)量是對照組的12倍;轉(zhuǎn)Gmr937-RNAi載體在根、莖中表達(dá)量是對照組的0.8倍,在葉片中表達(dá)量是對照組的0.7倍。以CaMV35s啟動(dòng)子為探針進(jìn)行Southern雜交檢測,在適宜條件下,轉(zhuǎn)化的目的基因以單拷貝整合到受體煙草基因組中。測量適宜條件下培育的轉(zhuǎn)基因煙草側(cè)根總長的結(jié)果表明,超表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株和RNAi干擾轉(zhuǎn)基因植株的側(cè)根平均總長均比干旱條件下長,且不同條件下超表達(dá)側(cè)根總長都比對照長,說明Gmr937基因?qū)?..

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 試驗(yàn)植物
        1.1.2 載體與菌種
        1.1.3 生物試劑
    1.2 方法
        1.2.1 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)基因植株
        1.2.2 轉(zhuǎn)基因煙草的分子生物學(xué)檢測
            (1)PCR檢測。
            (2)Southern雜交檢測。
            (3) qRT-PCR檢測。
        1.2.3 轉(zhuǎn)化煙草苗期側(cè)根總長的測量
        1.2.4 轉(zhuǎn)化煙草與抗旱相關(guān)生理生化指標(biāo)測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因煙草PCR檢測
    2.2 轉(zhuǎn)基因T1代煙草Southern雜交檢測
    2.3 T1代轉(zhuǎn)化煙草苗期qRT-PCR檢測
        2.3.1 正常條件下T1代轉(zhuǎn)化煙草苗期qRT-PCR檢測
        2.3.2 干旱條件下T1代轉(zhuǎn)化煙草苗期qRT-PCR檢測
    2.4 轉(zhuǎn)化煙草苗期側(cè)根總長的測定
    2.5 抗旱相關(guān)生理指標(biāo)的測定
3 討 論



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