發(fā)布時(shí)間：2023-11-11 18:26

　　采用PCR技術(shù)從魚腥藻(Anabaena sp. PCC7120)中擴(kuò)增藍(lán)細(xì)菌光敏色素基因片段alr1966gaf2,將alr1966gaf2插入到pET-30a(+)載體中,構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pET-alr1966gaf2。最后將Alr1966GAF2與HO1、PcyA在E. coli BL21(DE3)中共表達(dá)獲得色素蛋白Alr1966GAF2,并對(duì)該蛋白的光化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示,色素蛋白Alr1966GAF2結(jié)合色素為藻藍(lán)膽素(phycoerythrobilin,PCB)或藻紫膽素(phycoviolobilin,PVB),在3種不同吸收態(tài)15Z-P428 nm、中間態(tài)和15E-P514 nm之間具有順序可逆光效應(yīng)。通過定點(diǎn)突變技術(shù)將DXCF基序中的保守性Cys突變?yōu)锳la,獲得了突變體Alr1966GAF2(C72A)。將Alr1966GAF2(C72A)與HO1、PcyA共表達(dá),獲得色素蛋白Alr1966GAF2(C72A)。研究結(jié)果表明Alr1966GAF2(C72A)結(jié)合色素為PCB,Alr1966GAF2(C72A)-PCB具有較強(qiáng)的熒光活性,其熒光量子的產(chǎn)率高達(dá)0.1...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.2 熒光蛋白的表達(dá)與純化
        1.2.3 色素蛋白的SDS-PAGE
        1.2.4 色素蛋白的光譜分析
        1.2.5 色素蛋白質(zhì)的變性
3 結(jié)果與分析
    3.1 Alr1966GAF2色素蛋白的表達(dá)及其鋅熒光性質(zhì)
    3.2 Alr1966GAF2色素蛋白的光化學(xué)性質(zhì)及其順序可逆光效應(yīng)
    3.3 突變體Alr1966GAF2(C72A)結(jié)合PCB的光譜性質(zhì)
    3.4 突變體Alr1966GAF2(C72A)可以共價(jià)結(jié)合膽綠素
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