目的:探究人胚胎干細(xì)胞源神經(jīng)干細(xì)胞微囊泡對巨噬細(xì)胞極化的影響。方法:Dil標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞微囊泡,流式細(xì)胞儀和共聚焦顯微鏡觀察THP-1巨噬細(xì)胞對微囊泡的內(nèi)化;實時熒光定量PCR篩選微囊泡最適濃度;100 ng/m L脂多糖刺激THP-1細(xì)胞6 h后,微囊泡處理12 h,實時熒光定量PCR檢測巨噬細(xì)胞炎性因子IL-1β,腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)以及IL-6的mRNA表達(dá)水平;微囊泡處理24 h,蛋白免疫印跡法檢測誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)和精氨酸酶1 (Arginase-1,Arg-1)蛋白表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測THP-1巨噬細(xì)胞M1極化表面標(biāo)志CD86表達(dá)。結(jié)果:THP-1巨噬細(xì)胞在12 h和24 h均能明顯內(nèi)化神經(jīng)干細(xì)胞微囊泡; 0.12μg/m L微囊泡具有最適調(diào)控作用;與未處理細(xì)胞相比,脂多糖處理后明顯增加THP-1細(xì)胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和i NOS蛋白,Arg-1蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P <0.05);經(jīng)神經(jīng)干細(xì)胞微囊泡處...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 NSC-MVs提取和濃度測定
    1.4 THP-1內(nèi)化NSC-MVs
    1.5 THP-1巨噬細(xì)胞分組及相關(guān)指標(biāo)檢測
        1.5.1 實驗分組
        1.5.2 實時熒光定量PCR檢測THP-1巨噬細(xì)胞炎性因子mRNA表達(dá)
        1.5.3 蛋白質(zhì)印跡法檢測THP-1巨噬細(xì)胞i NOS和Arg-1蛋白表達(dá)
        1.5.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測THP-1巨噬細(xì)胞CD86表達(dá)
    1.6 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 巨噬細(xì)胞形態(tài)及內(nèi)化NSC-MVs觀察
    2.2 NSC-MVs抑制巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)
    2.3 NSC-MVs抑制巨噬細(xì)胞M1極化蛋白表達(dá)
3 討論



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