目的:探究人胚胎干細胞源神經干細胞微囊泡對巨噬細胞極化的影響。方法:Dil標記神經干細胞微囊泡,流式細胞儀和共聚焦顯微鏡觀察THP-1巨噬細胞對微囊泡的內化;實時熒光定量PCR篩選微囊泡最適濃度;100 ng/m L脂多糖刺激THP-1細胞6 h后,微囊泡處理12 h,實時熒光定量PCR檢測巨噬細胞炎性因子IL-1β,腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)以及IL-6的mRNA表達水平;微囊泡處理24 h,蛋白免疫印跡法檢測誘導型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)和精氨酸酶1 (Arginase-1,Arg-1)蛋白表達水平;流式細胞術檢測THP-1巨噬細胞M1極化表面標志CD86表達。結果:THP-1巨噬細胞在12 h和24 h均能明顯內化神經干細胞微囊泡; 0.12μg/m L微囊泡具有最適調控作用;與未處理細胞相比,脂多糖處理后明顯增加THP-1細胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和i NOS蛋白,Arg-1蛋白表達差異無統(tǒng)計學意義(P <0.05);經神經干細胞微囊泡處...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 細胞培養(yǎng)
    1.3 NSC-MVs提取和濃度測定
    1.4 THP-1內化NSC-MVs
    1.5 THP-1巨噬細胞分組及相關指標檢測
        1.5.1 實驗分組
        1.5.2 實時熒光定量PCR檢測THP-1巨噬細胞炎性因子mRNA表達
        1.5.3 蛋白質印跡法檢測THP-1巨噬細胞i NOS和Arg-1蛋白表達
        1.5.4 流式細胞術檢測THP-1巨噬細胞CD86表達
    1.6 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 巨噬細胞形態(tài)及內化NSC-MVs觀察
    2.2 NSC-MVs抑制巨噬細胞炎癥因子表達
    2.3 NSC-MVs抑制巨噬細胞M1極化蛋白表達
3 討論



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