植物在生長(zhǎng)發(fā)育過程中會(huì)遭遇各種逆境,WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族在這其中幾乎都有參與,本研究以丹東蒲公英(Taraxacum antungense Kitag.)為試驗(yàn)材料,研究了兩種非生物脅迫,兩種激素誘導(dǎo)后四種苯丙烷代謝途徑中關(guān)鍵酶基因相對(duì)表達(dá)量的變化,克隆了一名WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族成員,對(duì)其進(jìn)行研究,試驗(yàn)結(jié)果如下:1.在丹東蒲公英中成功克隆得到了WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族一名成員并命名為TaWRKY14(基因登錄號(hào):MH513939),TaWRKY14轉(zhuǎn)錄因子,全長(zhǎng)1056 bp,編碼351個(gè)氨基酸。TaWRKY14氨基酸序列的保守結(jié)構(gòu)域與擬南芥AtWRKY14的相同。系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果顯示TaWRKY14是WRKY IIe亞族基因,其親緣關(guān)系最接近的是丹參中的WRKY40。2.利用qRT-PCR對(duì)TaWRKY14表達(dá)模式進(jìn)行分析,對(duì)丹東蒲公英根、葉柄、葉、花中的WRKY14進(jìn)行組織特異性分析,結(jié)果表明WRKY14在丹東蒲公英根中含量最多,根>葉>葉柄>花,以葉中基因相對(duì)表達(dá)量視作1,根中的相對(duì)表達(dá)量高達(dá)4.8倍,其次是花和葉柄,在葉柄中表達(dá)量為0.65倍。根內(nèi)TaWRKY14基...

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 蒲公英本草與現(xiàn)代研究
    1.2 轉(zhuǎn)錄因子及轉(zhuǎn)錄因子家族
        1.2.1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族的發(fā)現(xiàn)
        1.2.2 WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族結(jié)構(gòu)
        1.2.3 WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族功能
        1.2.4 WRKY轉(zhuǎn)錄因子在生物脅迫中的作用
        1.2.5 WRKY轉(zhuǎn)錄因子在非生物脅迫中的作用
    1.3 外源誘導(dǎo)對(duì)植物次生代謝的影響
        1.3.1 非生物脅迫
        1.3.2 生物脅迫
        1.3.3 外源激素處理
    1.4 苯丙烷代謝途徑中的相關(guān)蛋白酶
    1.5 本試驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x
    1.6 本文技術(shù)路線圖
2 丹東蒲公英TaWRKY14 轉(zhuǎn)錄因子克隆及分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗(yàn)材料
        2.1.2 試驗(yàn)方法
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 TaWRKY14 目的基因擴(kuò)增結(jié)果
        2.2.2 重組pMD19-T-TaWRKY14 菌液PCR鑒定結(jié)果
        2.2.3 系統(tǒng)發(fā)育樹分析
        2.2.4 氨基酸序列比對(duì)分析
    2.3 小結(jié)
3 丹東蒲公英TaWRKY14 的表達(dá)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 試驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 TaWRKY14 基因的組織特異性分析
        3.2.2 鹽處理下TaWRKY14 基因相對(duì)表達(dá)量變化分析
        3.2.3 干旱處理下TaWRKY14 基因相對(duì)表達(dá)量變化分析
        3.2.4 水楊酸處理下TaWRKY14 基因相對(duì)表達(dá)量變化分析
        3.2.5 茉莉酸甲酯處理下TaWRKY14 基因相對(duì)表達(dá)量變化分析
    3.3 小結(jié)
4 TaWRKY14 調(diào)控苯丙烷代謝途徑的表達(dá)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 試驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 鹽處理后丹東蒲公英中綠原酸及咖啡酸的含量變化
        4.2.2 干旱處理后丹東丹東蒲公英中綠原酸及咖啡酸的含量變化
        4.2.3 激素處理后丹東蒲公英中綠原酸及咖啡酸的含量變化
        4.2.4 苯丙烷代謝途徑四種蛋白酶的基因相對(duì)表達(dá)量變化分析
    4.3 小結(jié)
5 體外驗(yàn)證TaWRKY14
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗(yàn)材料
        5.1.2 試驗(yàn)方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 啟動(dòng)子元件分析結(jié)果
        5.2.2 酵母單雜交結(jié)果
        5.2.3 TaWRKY14 目的基因的擴(kuò)增
        5.2.4 pMD19-T-TaWRKY14 載體的鑒定
        5.2.5 pET28a-TaWRKY14 載體的鑒定
        5.2.6 IPTG誘導(dǎo)重組TaWRKY14 蛋白表達(dá)結(jié)果
        5.2.7 亞細(xì)胞定位結(jié)果分析
    5.3 小結(jié)
討論與結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
縮寫詞表
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章



本文編號(hào)：3780423