目的:提高大鼠原代結(jié)腸平滑肌細胞(CSMCs)培養(yǎng)方法的實用性及操作性。方法:結(jié)腸平滑肌剪碎,37℃0. 25%胰蛋白酶消化30 min,離心,25%胎牛血清(FBS)原代培養(yǎng),20%FBS傳代培養(yǎng),免疫組織化學法鑒定。結(jié)果:原代培養(yǎng)第3天結(jié)腸平滑肌細胞貼壁生長及組織塊周圍細胞游離并生長,第7天生長密集,第9天細胞生長"峰-谷"狀。傳代培養(yǎng)第2天細胞貼壁,第7天見CSMCs增殖明顯,第9天細胞平行生長,呈"峰-谷"狀。對第3代CSMCs復蘇后第2天少許細胞開始貼壁生長;第8天細胞增殖明顯;第14天可見細胞呈亞融合狀態(tài)。免疫組化鑒定CSMCs胞質(zhì)為棕黃色,見與細胞長軸平行的α-肌動蛋白纖維細絲,陽性表達的細胞達95%以上。結(jié)論:CSMCs簡化培養(yǎng),操作簡單易行,值得推廣。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 主要實驗試劑
        1.1.3 主要實驗儀器
    1.2 工作液配制
    1.3 方法
        1.3.1 結(jié)腸取材及平滑肌分離
        1.3.2 CSMCs原代培養(yǎng)
        1.3.3 CSMCs傳代培養(yǎng)
        1.3.4 未完全解離的結(jié)腸平滑肌繼續(xù)培養(yǎng)
        1.3.5 CSMCs免疫組化細胞鑒定
        1.3.6 細胞凍存與復蘇
2 結(jié)果
    2.1 CSMCs培養(yǎng)結(jié)果
        2.1.1 原代培養(yǎng)
        2.1.2 傳代培養(yǎng)
        2.1.3 復蘇培養(yǎng)
    2.2 CSMCs免疫組化鑒定傳代細胞（2代）結(jié)果
    2.3 CSMCs原代細胞培養(yǎng)中的細胞污染
3 討論
    3.1 簡化培養(yǎng)步驟，提高方法的實用性及可操作性
    3.2 全程嚴格無菌操作
    3.3 結(jié)腸平滑肌精準取材及有效清除腸內(nèi)容物是細胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵
    3.4 適合的細胞培養(yǎng)方法是結(jié)腸平滑肌細胞培養(yǎng)成功的保證
    3.5 創(chuàng)新性對其未解離的結(jié)腸平滑肌組織塊進行原代培養(yǎng)



本文編號：3772883