目的:研究G-四鏈體(G4)對SUMO特異性蛋白酶1(SUMO-specific proteases 1,SENP1)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。方法:克隆不同的SENP1啟動子片段構(gòu)建SENP1啟動子報(bào)告質(zhì)粒,通過報(bào)告基因檢測鑒定SENP1啟動子核心轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū);分析SENP1啟動子核心轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)序列,并進(jìn)行G4形成序列預(yù)測;合成G4形成序列寡核苷酸,利用圓二色譜分析檢測G4形成序列寡核苷酸的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu);通過G4配體TMPyP4處理和過表達(dá)G4解旋酶G4R1結(jié)合報(bào)告基因檢測和Western blot鑒定啟動子G4對SENP1轉(zhuǎn)錄表達(dá)的調(diào)控作用。結(jié)果:發(fā)現(xiàn)-910～+226區(qū)域是SENP1啟動子的核心轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū),序列富含G/C;生信分析發(fā)現(xiàn)SENP1啟動子核心區(qū)存在G4形成序列;圓二色譜分析證實(shí)SENP1啟動子G4形成序列能夠形成G4結(jié)構(gòu);報(bào)告基因檢測和Western blot檢測發(fā)現(xiàn)啟動子G4對SENP1轉(zhuǎn)錄表達(dá)具有抑制作用。結(jié)論:SENP1啟動子核心轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)存在G4結(jié)構(gòu)并對其轉(zhuǎn)錄表達(dá)具有抑制作用,為揭示SENP1在生理和病理過程中的作用機(jī)制提供新的研究思路和試驗(yàn)線索。

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞
    1.2 試劑
    1.3 方法
        1.3.1 質(zhì)粒構(gòu)建
        1.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.3.3 螢光素酶報(bào)告基因檢測
        1.3.4 圓二色譜分析
        1.3.5 Western blot檢測
        1.3.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 SENP1核心啟動子鑒定
    2.2 SENP1啟動子核心序列分析及G4形成序列預(yù)測
    2.3 SENP1啟動子區(qū)G4形成序列的圓二色譜分析
    2.4 G4配體TMPyP4對SENP1表達(dá)的影響
    2.5 G4解旋酶G4R1對SENP1表達(dá)的影響
3 討論



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