木聚糖酶是微生物半纖維素降解體系中的一種關鍵酶,被廣泛地應用在工業(yè)中的多個領域。本研究為了提高木聚糖酶Umxyn10A (ABL73-883.1)的熱穩(wěn)定性,將Umxyn10A與GH 10家族4種耐熱木聚糖酶進行多序列同源比對以及三維結構的同源建模分析,選定了Umxyn10A第31位氨基酸位點進行定點突變,將氨基酸Ala (A)突變?yōu)镻he (F)。分別將Umxyn10A和Umxyn10A^A31F在大腸桿菌中進行重組表達,分析2種重組酶的酶學特性,結果發(fā)現(xiàn),Umxyn10A^A31F的最適反應溫度為85℃,較野生重組酶提高了5℃;在65℃下的半衰期為105 min,較野生重組酶(15 min)提高了6倍;在70℃下突變重組酶的半衰期為15 min,較野生重組酶(5 min)提高了2倍;與此同時突變重組酶的pH耐受區(qū)間較原酶也有一定的增大。結果表明,將第31位氨基酸位點Ala突變?yōu)镻he能夠顯著的提高Umxyn10A的熱穩(wěn)定性。

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【文章目錄】：
1 結果與分析
    1.1 突變位點的選擇
    1.2 重組表達質粒的構建
    1.3 木聚糖酶Umxyn10AA31F的重組表達與純化
    1.4 重組木聚糖酶Umxyn10AA31F溫度特性
    1.5 木聚糖酶Umxyn10AA31F的pH特性
2 討論
3 材料與方法
    3.1 菌株、質粒和培養(yǎng)基
    3.2 主要試劑
    3.3 定點突變位點的選擇
    3.4 重組表達質粒的構建
    3.5 重組木聚糖酶基因的誘導表達與純化
    3.6 木聚糖酶酶活的測定
    3.7 溫度對木聚糖酶活性的影響
    3.8 p H對木聚糖酶酶活性的影響



本文編號：3743738