隨著脫氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acids,DNA)信號放大技術(shù)的發(fā)展,它已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)生物研究、生物醫(yī)學(xué)、食品等方面,成為最有應(yīng)用價值的分析方法之一。同時,電化學(xué)分析方法也憑借靈敏度高、成本低、小型便攜等優(yōu)勢常常與DNA信號放大技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于生物分子(DNA、RNA、蛋白質(zhì)、小分子等)的檢測。本文構(gòu)建了兩種基于DNA信號放大技術(shù)的電化學(xué)生物傳感器分別用于蛋白質(zhì)和m RNA的檢測。1.免疫測定和酶活分析相結(jié)合的電化學(xué)生物傳感器用于人脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1的精準(zhǔn)分析人脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1(Human apurinic/apyrimidinic endonuclease1,APE1)是一種細(xì)胞內(nèi)多功能酶,在細(xì)胞的周期控制、轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)以及氧化應(yīng)激反應(yīng)等方面起著重要作用。除此之外,APE1在核酸的堿基切除修復(fù)中也起著非常關(guān)鍵的作用。在這里,我們發(fā)展了一種兼顧免疫分析和酶活分析的新型電化學(xué)生物傳感方法用于APE1的酶活測定。其基本原理是設(shè)計(jì)和構(gòu)建了一個可被APE1催化激活的DNA催化發(fā)夾自組裝序列結(jié)構(gòu),并將該結(jié)構(gòu)的DNA用具有電活性的Cd S和Pb S量子...

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 DNA信號放大技術(shù)概述
        1.1.1 DNA等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)
            1.1.1.1 鏈置換介導(dǎo)的DNA信號放大
                (1)催化發(fā)夾自組裝反應(yīng)(CHA)
                (2)雜交鏈置換反應(yīng)(HCR)
        1.1.2 核酸酶介導(dǎo)的DNA信號放大
            1.1.2.1 DNA酶的類過氧化物酶活性
            1.1.2.2 DNA酶的特定核酸切割活性
        1.1.3 DNA信號放大技術(shù)的標(biāo)記分類
            1.1.3.1 納米材料標(biāo)記
                (1)金納米顆粒
                (2)量子點(diǎn)
                (3)碳納米管
            1.1.3.2 分子信標(biāo)(MBs)
    1.2 電化學(xué)生物傳感器
        1.2.1 電化學(xué)生物傳感系統(tǒng)
            1.2.1.1 電化學(xué)免疫傳感器
            1.2.1.2 電化學(xué)核酸生物傳感器
            1.2.1.3 電化學(xué)酶促生物傳感器
        1.2.2 電化學(xué)檢測方法分類
            1.2.2.1 電化學(xué)阻抗譜法(Electrochemical impedance spectrum,EIS)
            1.2.2.2 陽離子溶出伏安法(Anodic stripping voltammetry,ASV)
        1.2.3 電化學(xué)生物傳感器的應(yīng)用
    1.3 本論文主要研究內(nèi)容
    1.4 參考文獻(xiàn)
第二章 免疫測定和酶活分析相結(jié)合的電化學(xué)生物傳感器用于人脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶1的精準(zhǔn)分析
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 試劑和儀器
        2.2.2 硫化鎘量子點(diǎn)(Cadmium sulfide quantum dots,Cd S QDs)的制備
        2.2.3 由APE1活化的催化發(fā)夾裝配體的構(gòu)建
        2.2.4 凝膠電泳分析和熒光測量
        2.2.5 Hairpin I/II上量子點(diǎn)的連接
        2.2.6 APE1觸發(fā)的催化發(fā)夾組件
        2.2.7 電極界面修飾和免疫組裝
        2.2.8 陽極溶出伏安法測量信號
        2.2.9 酶聯(lián)免疫吸附劑測定
        2.2.10 實(shí)際樣本檢測
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)原理
        2.3.2 APE1酶切效率研究
        2.3.3 APE1 引發(fā)的DNA催化發(fā)夾裝配
        2.3.4 免疫功能化電極的表征
        2.3.5 Cd S量子點(diǎn)與Pb S量子點(diǎn)的表征
        2.3.6 集成的免疫電化學(xué)生物傳感器分析
        2.3.7 集成的電化學(xué)檢測系統(tǒng)與傳統(tǒng)熒光探針檢測方法的比較
        2.3.8 集成的電化學(xué)檢測系統(tǒng)與酶聯(lián)免疫分析(ELISA)檢測方法的比較
        2.3.9 實(shí)際樣品分析
    2.4 結(jié)論
    2.5 參考文獻(xiàn)
第三章 聚多巴胺輔助的電化學(xué)生物傳感器用于miR208a檢測的研究
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 試劑與儀器
        3.2.2 CdTe量子點(diǎn)的制備
        3.2.3 DNA六角星G4(Hexagon Star G4,Hex SG4)的形成
        3.2.4 HexSG4的催化效果實(shí)驗(yàn)
        3.2.5 磁納米復(fù)合物的形成與分離純化
        3.2.6 CdTe量子點(diǎn)的沉積
        3.2.7 共聚焦顯微鏡檢測CdTe量子點(diǎn)信號
        3.2.8 陽極溶出伏安法檢測信號
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)原理
        3.3.2 HexSG4的形成表征
        3.3.3 靶標(biāo)miR208a誘導(dǎo)的三體結(jié)構(gòu)的表征(C+T+Hex SG4)
        3.3.4 HexSG4催化多巴胺形成聚多巴胺的表征
        3.3.5 熒光法檢測靶標(biāo)miR208a
        3.3.6 電化學(xué)方法表征靶標(biāo)miR208a的檢測
    3.4 結(jié)論
    3.5 參考文獻(xiàn)
第四章 總結(jié)與展望
作者在攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3741184