目的探討應(yīng)用規(guī)律成簇的間隔短回文重復(fù)(CRISPR)/CRISPR相關(guān)蛋白9(Cas9系統(tǒng)靶向敲除多溴蛋白1(PBRM1)基因?qū)Ω伟┘?xì)胞功能的影響。方法應(yīng)用CRISPR/Cas9系統(tǒng)靶向敲除Huh7細(xì)胞的PBRM1基因。采用Sanger測(cè)序和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)基因敲除情況�；谵D(zhuǎn)錄本測(cè)序(RNA-seq)結(jié)果,對(duì)Huh7敲除(KO)細(xì)胞株與Huh7野生(WT)細(xì)胞系差異表達(dá)基因進(jìn)行功能富集。采用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期的改變。通過(guò)CCK-8法和克隆形成實(shí)驗(yàn)研究細(xì)胞增殖情況。采用不同濃度的γ-干擾素(IFN-γ)處理Huh7-KO細(xì)胞株和Huh7-WT細(xì)胞系,驗(yàn)證GO富集中IFN-γ應(yīng)答通路的改變。結(jié)果成功構(gòu)建PBRM1基因敲除的Huh7細(xì)胞株。Huh7-KO細(xì)胞株的生長(zhǎng)曲線(xiàn)和克隆形成率均顯著慢于Huh7-WT細(xì)胞系(P <0.000 1)。Huh7-KO細(xì)胞株中下調(diào)基因主要與細(xì)胞周期相關(guān),上調(diào)基因主要與免疫應(yīng)答相關(guān)。Huh7-KO細(xì)胞株處于G1期的細(xì)胞比例明顯高于Huh7-WT細(xì)胞系(P=0.016 6),而處于S期的細(xì)胞比例明顯低于Huh7-WT細(xì)胞系(...

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材料與方法
結(jié)果
討論



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