Atrogin-1是一種保守的E3泛素連接酶,在饑餓和炎癥性疾病后骨骼肌和心肌的萎縮和退化的早期階段中起重要作用,是調(diào)節(jié)哺乳動物和魚類骨骼肌質(zhì)量的一種主要蛋白質(zhì)。本實驗克隆了黃鱔的atrogin-1基因的cDNA全長序列,得到了兩種可變剪切體。黃鱔的atrogin-1 x1的mRNA序列為2361bp,包括1074bp的編碼序列,編碼357個氨基酸,預(yù)測質(zhì)量為41.8kD,等電點（PI）為8.77。另一個可變剪切體atrogin-1x2的mRNA序列有2353bp,包括894bp的編碼序列,編碼298個氨基酸,預(yù)測質(zhì)量為34.8kD,等電點（PI）為9.26。atrogin-1 x1與atrogin-1 x2只有5’端不同,表明調(diào)控他們表達的轉(zhuǎn)錄因子有可能不同;3’端非編碼序列相同。預(yù)測的蛋白質(zhì)序列都有40個氨基酸左右的F-box保守區(qū)域。對健康、喂食的黃鱔的心、肝胰腺（簡稱肝）、脾、頭腎、體腎、前腸、后腸8個組織的組織表達進行了相對定量分析,以在各組織都能穩(wěn)定表達的RPL17基因作為內(nèi)參基因?qū)Ρ磉_量進行分析。結(jié)果顯示與哺乳動物不同,atrogin-1 x1和atrogin-1 x2在... 

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 黃鱔簡介
        1.1.1 黃鱔的生活習性和養(yǎng)殖現(xiàn)狀
        1.1.2 黃鱔的研究進展
    1.2 骨骼肌萎縮的相關(guān)研究
        1.2.1 骨骼肌萎縮的誘因
        1.2.2 骨骼肌萎縮關(guān)鍵基因的研究進展
        1.2.3 骨骼肌萎縮相關(guān)信號通路與調(diào)控機制
        1.2.4 魚類骨骼肌萎縮
    1.3 饑餓對魚類的肌肉萎縮的影響
    1.4 LPS對魚類的肌肉萎縮的影響
        1.4.1 LPS的毒性
        1.4.2 對魚類的毒性
        1.4.3 在魚類免疫中的作用
        1.4.4 LPS對骨骼肌萎縮的影響
    1.5 研究目的與意義
第二章 Atrogin-1基因克隆和序列分析
    2.1 實驗材料與方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 黃鱔組織取材
        2.2.2 黃鱔組織RNA的提取(試劑盒法)
        2.2.3 黃鱔組織cDNA第一鏈的合成
        2.2.4 RACE法擴增atrogin-1的5’和3’末端
        2.2.5 atrogin-1中間片段的擴增和測序
        2.2.6 atrogin-1的序列全長拼接及分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 PCR結(jié)果
        2.3.2 黃鱔atrogin-1基因序列分析
        2.3.3 黃鱔atrogin-1氨基酸理化分析
        2.3.4 黃鱔atrogin-1二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
        2.3.5 atrogin-1 氨基酸序列同源性比對及系統(tǒng)進化樹構(gòu)建
    2.4 討論
第三章 黃鱔atrogin-1 基因的表達分析
    3.1 實驗材料
    3.2 實驗步驟
        3.2.1 RNA的提取
        3.2.2 cDNA的合成
            3.2.2.1 基因組DNA的去除反應(yīng)
            3.2.2.2 逆轉(zhuǎn)錄
        3.2.3 Real Time PCR反應(yīng)
            3.2.3.1 引物合成
            3.2.3.2 定量實驗
        3.2.4 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 RNA的提取結(jié)果
        3.3.2 用熒光定量PCR法檢驗黃鱔atrogin-1兩種可變剪切體的組織表達特性
    3.4 討論
第四章 禁食和LPS對萎縮相關(guān)基因的表達的影響
    4.1 實驗材料
    4.2 實驗方法
        4.2.1 實驗動物處理
        4.2.2 熒光定量PCR反應(yīng)
            4.2.2.1 定量引物
            4.2.2.2 定量實驗
        4.2.3 數(shù)據(jù)處理
    4.3 實驗結(jié)果與分析
        4.3.1 饑餓對黃鱔萎縮通路相關(guān)基因表達的影響
        4.3.2 脂多糖對黃鱔萎縮相關(guān)基因表達的影響
    4.4 討論
        4.4.1 饑餓對骨骼肌萎縮的影響
        4.4.2 脂多糖對骨骼肌萎縮的影響
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
        5.1.1 黃鱔atrogin-1基因的克隆和組織表達
        5.1.2 饑餓對黃鱔atrogin-1基因表達的影響
        5.1.3 LPS刺激對黃鱔atrogin-1基因表達的影響
    5.2 展望
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]TNP-LPS和TNP-KLH誘導的虹鱒（Oncorhynchus mykiss）抗體分泌細胞的分化研究[D]. 馬璀艷.中國海洋大學 2011



本文編號：3717763