目的:羊水間充質干細胞（AF-MSCs）具有良好的自我再生能力、較強的可塑性以及低免疫原性與低成瘤性,體外生長不易衰老,因此較之成體干細胞具有更好的再生醫(yī)學前景。然而,由于目前AF-MSCs的體外培養(yǎng)缺乏統(tǒng)一標準,導致其生物學特點存在多樣性,各項研究之間缺乏可比性,難以明確不同胎齡來源的AF-MSCs之間的差異,因而阻礙了其在臨床的應用。此外,雖然AF-MSCs的形態(tài)、增殖及分化的異質性被廣泛認知,然而其異質性的起源及異質性引發(fā)差異的機制還不甚明了,亟需一些技術手段對此進行分析。而轉錄組測序是研究特定細胞在某一發(fā)育階段或功能狀態(tài)下所能轉錄出來的所有RNA的總和,能夠從整體水平研究基因功能以及基因結構,揭示特定的生物學過程,它已廣泛應用于基礎研究、臨床診斷和藥物研發(fā)等領域。因此應用轉錄組對不同發(fā)育階段AF-MSCs進行研究,可以幫助我們進一步了解不同發(fā)育階段AF-MSCs差異產(chǎn)生的原因,讓干細胞治療更好的有的放矢。研究方法:1.AF-MSCs的分離及培養(yǎng)無菌條件下吸取大鼠E12、E15、E18及E21的羊水,4℃離心（1800轉）15分鐘,PBS清洗2遍,用含10%胎牛血清的DMEM/F... 

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分:大鼠胚胎不同發(fā)育階段羊水間充質干細胞的生物學特性研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 試劑和材料
            2.1.2 實驗儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 實驗動物
            2.2.2 孕鼠羊水采集
            2.2.3 AF-MSCs培養(yǎng)
            2.2.4 AF-MSCs表面標志物鑒定
            2.2.5 AF-MSCs誘導分化及固定染色
            2.2.6 BrdU檢測
            2.2.7 AF-MSCs增殖曲線
            2.2.8 AF-MSCs劃痕實驗
            2.2.9 AF-MSCs transwell小室遷移實驗
        2.3 統(tǒng)計方法
    3 結果
        3.1 不同胚胎發(fā)育階段來源的AF-MSCs的培養(yǎng)與鑒定
            3.1.1 不同胚胎發(fā)育階段的AF-MSCs在培養(yǎng)過程中的差異
            3.1.2 表面標志物鑒定
            3.1.3 三系誘導分化能力
        3.2 細胞增殖能力評估
        3.3 細胞遷移能力評估
    4 討論
    5 結論
第二部分:大鼠胚胎不同發(fā)育階段羊水間充質干細胞的全轉錄組學分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗試劑
            2.1.2 實驗儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞RNA提取
            2.2.2 AF-MSCs全轉錄組測序
            2.2.3 生物信息學分析
            2.2.4 個性化分析
    3 結果
        3.1 不同胚胎發(fā)育階段來源AF-MSCs的轉錄組概況
            3.1.1 檢測數(shù)據(jù)總體分析情況
            3.1.2 不同組差異表達分析
        3.2 生物信息學個性化分析——增殖
        3.3 生物信息學個性化分析——增殖和遷移
    4 討論
    5 結論
第三部分:miR-351-3p通過靶向Abca4 發(fā)揮促AF-MSCs增殖的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗試劑
            2.1.2 實驗儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞RNA提取
            2.2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.3 Abca4過表達質粒構建
            2.2.4 Abca4 CDS區(qū)雙螢光素酶質粒構建
            2.2.5 質粒提取
            2.2.6 細胞轉染
            2.2.7 實時熒光定量PCR
            2.2.8 細胞蛋白提取與定量
            2.2.9 Western Blot
            2.2.10 細胞增殖曲線
            2.2.11 雙螢光素酶報告基因實驗
        2.3 統(tǒng)計方法
    3 結果
        3.1 RT-q PCR證實Abca4與miR-351-3p表達量變化趨勢一致
        3.2 Abca4 抑制了AF-MSCs的增殖
        3.3 miR-351-3p抑制Abca4 的表達
        3.4 miR-351-3p與 Abca4在CDS區(qū)存在結合位點
    4 討論
    5 結論
第四部分:miR-532-3p通過靶向Chrdl1 發(fā)揮促AF-MSCs增殖與遷移的作用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗試劑
            2.1.2 實驗儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 細胞RNA提取
            2.2.2 細胞培養(yǎng)
            2.2.3 過表達質粒構建
            2.2.4 雙螢光素酶報告基因質粒構建
            2.2.5 質粒提取
            2.2.6 細胞轉染
            2.2.7 實時熒光定量PCR
            2.2.8 細胞蛋白提取與定量
            2.2.9 Western Blot
            2.2.10 細胞增殖曲線
            2.2.11 Transwell細胞遷移實驗
            2.2.12 雙螢光素酶實驗
        2.3 統(tǒng)計方法
    3 結果
        3.1 Chrdl1與miR-532-3p表達趨勢與轉錄組一致
        3.2 Chrdl1 抑制AF-MSCs的增殖
        3.3 Chrdl1 抑制AF-MSCs的遷移
        3.4 miR-532-3p抑制Chrdl1 的表達,促進AF-MSCs的增殖
        3.5 miR-532-3p靶向Chrdl1 促進AF-MSCs的增殖與遷移
    4 討論
    5 結論
附錄
對本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝



本文編號：3710797