【目的】建立浮萍原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)體系,以加快浮萍生物反應(yīng)器工程的開發(fā)進(jìn)程�！痉椒ā坎捎妹附夥ㄖ苽涓∑荚|(zhì)體,通過對(duì)愈傷組織類型、滲透壓、預(yù)處理方法等一系列參數(shù)的優(yōu)化調(diào)整,建立了浮萍原生質(zhì)體制備方法。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)外源基因進(jìn)入浮萍愈傷組織,并制備原生質(zhì)體觀察瞬時(shí)表達(dá)情況,通過對(duì)農(nóng)桿菌種類、菌濃度、乙酰丁香酮濃度及共培養(yǎng)時(shí)間等參數(shù)進(jìn)行調(diào)整,篩選最佳的浸染條件。最后利用該瞬時(shí)表達(dá)體系進(jìn)行亞細(xì)胞定位研究和啟動(dòng)子功能驗(yàn)證�！窘Y(jié)果】原生質(zhì)體制備的最佳條件為:以4℃過夜培養(yǎng)的浮萍懸浮培養(yǎng)愈傷組織為制備材料,用酶液（2%纖維素酶、0.5%離析酶、0.5%果膠酶、0.1 mol/L CaCl₂、0.2 mol/L KCl、1%BSA、20 mmol/L MES pH 5.8、0.5 mol/L甘露醇）于25℃避光消化16 h（40 r/min）;農(nóng)桿菌浸染最佳條件為:農(nóng)桿菌GV301在菌濃度(OD₆₀₀)為1、乙酰丁香酮濃度為100μmol/L時(shí),浸染懸浮培養(yǎng)愈傷有最大轉(zhuǎn)化率�！窘Y(jié)論】成功建立了浮萍原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)體系,并證明其可用于亞細(xì)胞定位和啟動(dòng)子功能驗(yàn)... 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 試劑
    1.3 方法
        1.3.1 擬南芥基因擴(kuò)增
        1.3.2 載體構(gòu)建
        1.3.3 原生質(zhì)體產(chǎn)率測(cè)定
        1.3.4 原生質(zhì)體活性測(cè)定
        1.3.5 浮萍原生質(zhì)體制備參數(shù)優(yōu)化
        1.3.6 農(nóng)桿菌浸染參數(shù)優(yōu)化
        1.3.7 浮萍原生質(zhì)體亞細(xì)胞定位
        1.3.8 啟動(dòng)子功能檢測(cè)
2 結(jié)果與分析
    2.1 材料類型對(duì)原生質(zhì)體制備產(chǎn)率和活性的影響
    2.2 滲透壓濃度對(duì)原生質(zhì)體制備產(chǎn)率和活性的影響
    2.3 預(yù)處理方法對(duì)原生質(zhì)體制備產(chǎn)率和活性的影響
    2.4 農(nóng)桿菌浸染參數(shù)對(duì)轉(zhuǎn)化率的影響
    2.5 亞細(xì)胞定位
    2.6 啟動(dòng)子功能檢測(cè)
3 討 論
4 結(jié) 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3705086