背景:尖孢鐮刀菌亞麻�；蚚Fusarium oxysporum Schl. f. sp. Lini （Bolley） Snyder＆Hansen]是一種引起亞麻枯萎病的土傳真菌,對亞麻的產(chǎn)量及質(zhì)量有嚴(yán)重的危害。研究表明,在小麥赤霉菌中C2H2型鋅指轉(zhuǎn)錄因子Pcs1調(diào)控中間瓶梗（intercalary phialides）產(chǎn)生分生孢子。目的:鑒定pcs1同源基因Folpcs1在鐮刀菌中的作用。方法:對Folpcs1的基因組DNA及cDNA測序后,利用Split-Marker基因敲除技術(shù)破壞該基因。構(gòu)建含有潮霉素抗性基因（hph）的基因缺失盒。通過聚乙二醇（PEG）轉(zhuǎn)化野生型原生質(zhì)體法,獲得了Folpcs1基因缺失突變株（ΔFolpcs1）,并利用PCR法進行正負(fù)篩選。為了對缺失突變體互補,將pcs1及其上下游側(cè)翼序列構(gòu)建到pZWH1中后,回復(fù)到ΔFolpcs1中。結(jié)果:測序結(jié)果表明,有一個654bp的內(nèi)含子,cDNA序列長度為2 846bp。通過觀察發(fā)現(xiàn),敲除突變體的生長速率明顯降低,培養(yǎng)基中幾乎觀察不到分生孢子�；貜�(fù)突變體回復(fù)了野生型菌株的生長速率及分生孢子產(chǎn)生過程。結(jié)論:說明Fol... 

【文章頁數(shù)】：17 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 試劑
    1.3 實驗方法
        1.3.1 尖孢鐮刀菌pcs1基因的克隆、測序及末端確定
        1.3.2 引物設(shè)計
        1.3.3 Folpcs1基因生物信息學(xué)分析
        1.3.4 Folpcs1基因缺失盒的構(gòu)建
        1.3.5 Folpcs1基因敲除轉(zhuǎn)化子的篩選與鑒定
        1.3.6 Folpcs1基因敲除突變體、外插入以及野生型表型和致病力變化
        1.3.7 Folpcs1基因功能互補測驗
        1.3.8 Folpcs1基因互補轉(zhuǎn)化子的篩選與鑒定
        1.3.9 Folpcs1基因回復(fù)突變體表型檢測
2 結(jié)果與分析
    2.1 亞麻�；图怄哏牭毒鷓cs1基因序列的確定
        2.1.1 亞麻�；图怄哏牭毒蚪MDNA及總RNA的提取
        2.1.2 Folpcs1基因c DNA末端克隆
        2.1.3 Folpcs1基因組DNA與c DNA序列的獲得
    2.2 Folpcs1基因生物信息學(xué)分析
        2.2.1 同源性分析
        2.2.2 系統(tǒng)進化分析
    2.3 Folpcs1基因的敲除
        2.3.1 Folpcs1基因敲除盒的構(gòu)建
        2.3.2 轉(zhuǎn)化子的篩選與鑒定
    2.4 Folpcs1基因敲除突變體表型及其致病力
    2.5 Folpcs1基因功能互補測驗
        2.5.1 Folpcs1基因重組質(zhì)粒p ZGH1(pZWH1+Folpcs1)的構(gòu)建
        2.5.2 重組質(zhì)粒p ZGH1的篩選
        2.5.3 轉(zhuǎn)化子的篩選與鑒定
    2.6 Folpcs1基因回復(fù)突變體表型檢測
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]小麥赤霉菌FGSG08948基因敲除及功能研究[J]. 郭雪芳,侯占銘.  分子植物育種. 2018(08)
[2]小麥赤霉菌FGSG<sub>04871基因敲除及功能研究[J]. 彭海麗,侯占銘.  內(nèi)蒙古師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)漢文版). 2017(03)
[3]亞麻苗期病害發(fā)生特點及防治技術(shù)研究[J]. 楊學(xué).  中國麻業(yè). 2003(05)
[4]亞麻枯萎病發(fā)生規(guī)律及其綜合防治措施[J]. 楊學(xué) ,王玉富 ,關(guān)鳳芝 ,路影 ,宋憲友 ,張福修 ,康慶華 ,劉燕 ,吳廣文 ,曲瑞璞.  中國麻業(yè). 2002(01)
[5]尖孢鐮刀菌的遺傳多態(tài)性[J]. 王政逸,李德葆.  植物病理學(xué)報. 2000(03)
[6]高抗萎蔫病胡麻品種資源的篩選利用及抗病性遺傳淺析[J]. 楊萬榮,薄天岳.  華北農(nóng)學(xué)報. 1994(S1)

碩士論文
[1]小麥赤霉菌FgAC1基因敲除及功能研究[D]. 吳彬.內(nèi)蒙古師范大學(xué) 2011
[2]尖孢鐮刀菌Qip基因功能初步研究[D]. 程琳.山西師范大學(xué) 2015



本文編號：3702883