PGC7是一個(gè)在哺乳動物生殖細(xì)胞、卵母細(xì)胞、植入前胚胎和多能性細(xì)胞中特異表達(dá)的母源效應(yīng)因子。PGC7的表達(dá)狀態(tài)與小鼠ES細(xì)胞的多能性水平有關(guān),PGC7的高表達(dá)水平也有助于維持胚胎干細(xì)胞和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的低甲基化水平,這些結(jié)果表明PGC7在維持細(xì)胞多能性方面發(fā)揮重要作用。Nanog由305個(gè)氨基酸組成,具有保守的同源異型結(jié)構(gòu)域,在小鼠植入前胚胎和ES細(xì)胞等多能性細(xì)胞中特異性表達(dá),隨著細(xì)胞多能性下降而表達(dá)量降低,表明Nanog對于多能性的維持存在劑量效應(yīng),并且表達(dá)水平與細(xì)胞分化程度和多能性層次密切相關(guān)。STAT家族蛋白包括STAT1-4、STAT5a、STAT5b和STAT6,已經(jīng)有研究表明STAT家族蛋白對胚胎干細(xì)胞多能性的調(diào)控存在貢獻(xiàn)。LIF/gp130/STAT3信號通路是發(fā)現(xiàn)最早的小鼠ES細(xì)胞多潛能性維持通路,LIF通過激活STAT3來調(diào)控靶基因表達(dá),抑制ES細(xì)胞的分化,從而維持小鼠ES細(xì)胞的多能性狀態(tài)。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)一種獨(dú)立于LIF-JAK-STAT3的新的途徑,即Vc可以激活JAK2/STAT2信號傳導(dǎo)途徑,而活化的STAT2結(jié)合到Nanog啟動子的近端區(qū)域并在ESC中促進(jìn)Nan... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 PGC7 的生物學(xué)功能及研究進(jìn)展
        1.1.1 PGC7 的生物學(xué)特征
        1.1.2 PGC7 在早期胚胎發(fā)育中的作用
        1.1.3 PGC7在DNA甲基化調(diào)控中的作用
        1.1.4 PGC7 在染色質(zhì)調(diào)控中的作用
        1.1.5 PGC7 在多能性中的作用
    1.2 STAT家族蛋白研究進(jìn)展
        1.2.1 STAT家族蛋白概述
        1.2.2 STAT家族蛋白在調(diào)控細(xì)胞多能性中的作用
第二章 PGC7與STAT1 互作驗(yàn)證及對STAT1 細(xì)胞定位的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 儀器與耗材
        2.1.4 主要溶液配制
        2.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.1.6 總RNA提取與反轉(zhuǎn)錄
        2.1.7 STAT1 標(biāo)簽表達(dá)載體構(gòu)建載體構(gòu)建
        2.1.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.1.9 免疫印跡(Western Blot,WB)
        2.1.10 蛋白質(zhì)免疫共沉淀(Co-iP)
        2.1.11 免疫熒光染色
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 STAT1 真核表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.2 PGC7與STAT1 的互作驗(yàn)證
        2.2.3 STAT1 結(jié)構(gòu)域分析
        2.2.4 STAT1 及其截短體真核表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.5 PGC7與STAT1 互作結(jié)構(gòu)域分析
        2.2.6 PGC7與STAT1 的細(xì)胞內(nèi)共定位
        2.2.7 PGC7與STAT1 截短體的細(xì)胞內(nèi)共定位
        2.2.8 PGC7對STAT1 的磷酸化水平的影響
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
第三章 PGC7 激活STAT1 的活性
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 儀器與耗材
        3.1.4 主要溶液配制
        3.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        3.1.6 總RNA提取與反轉(zhuǎn)錄
        3.1.7 PTPN6a表達(dá)載體構(gòu)建
        3.1.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        3.1.9 蛋白質(zhì)免疫共沉淀(Co-Ip)
        3.1.10 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 PTPN6a真核表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.2 磷酸化修飾蛋白的免疫印跡法(Phosphorylated Western Blot)
        3.2.3 蛋白質(zhì)免疫共沉淀檢測PGC7 對于PTPN6a與 STAT1 的互作影響
        3.2.4 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測ISRE報(bào)告載體活性
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 PGC7與STAT1 的互作參與胚胎干細(xì)胞多能性維持
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 儀器與耗材
        4.1.4 主要溶液配制
        4.1.5 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        4.1.6 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
        4.1.8 SYBR實(shí)時(shí)熒光定量
        4.1.9 AP染色(Alkaline phosphatase staining)
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 PGC7與STAT1 對于Nanog啟動子活性的影響
        4.2.2 PGC7與STAT1 對于Nanog和 OCT4 基因表達(dá)水平的影響
        4.2.3 PGC7與STAT1 對于F9 細(xì)胞整體多能性水平的影響
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]胚胎干細(xì)胞多潛能性維持的分子機(jī)制[J]. 王慶忠,劉以訓(xùn),韓春生.  科學(xué)通報(bào). 2005(15)

博士論文
[1]PGC7互作蛋白的鑒定及功能研究[D]. 劉紅亮.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2017



本文編號：3696106