目的:通過構(gòu)建不同組合的人源化肝細(xì)胞二維共培養(yǎng)體系,從細(xì)胞活性及主要細(xì)胞色素酶基因表達(dá)層面比較不同共培養(yǎng)體系作為代謝活化系統(tǒng)的優(yōu)越性,并通過體外微核試驗對優(yōu)勢共培養(yǎng)體系的代謝活化能力進(jìn)行初步的驗證,為人源化細(xì)胞共培養(yǎng)代謝活化系統(tǒng)在遺傳毒性試驗和致突變性試驗中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。方法:1.共培養(yǎng)模型的構(gòu)建及細(xì)胞生長狀態(tài)的觀察與測定:應(yīng)用穿孔法制作共培養(yǎng)6孔板。選擇人肝癌HepG2/C3A細(xì)胞、人結(jié)直腸腺癌Caco-2細(xì)胞、人腎小管上皮HK-2細(xì)胞、人臍靜脈內(nèi)皮HUVEC細(xì)胞、人肝星形LX-2細(xì)胞作為共培養(yǎng)模型構(gòu)建的待選細(xì)胞系。分別設(shè)置各細(xì)胞的單獨(dú)培養(yǎng)組,四種雙細(xì)胞共培養(yǎng)組 HepG2/C3A-Caco2（CL）、HepG2/C3A-HK2（CH）、HepG2/C3A-HUVEC（CU）和 HepG2/C3A-LX2（CL）,以及六種三細(xì)胞共培養(yǎng)組HepG2/C3A-Caco2-HK2(（COH）、HepG2/C3A-Caco2-HUVEC（COU）、HepG2/C3A-Caco2-LX2（COL）、HepG2/C3A-HK2-HUVEC（CHU）、HepG2/C3A-HK2-L... 

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
英文縮寫詞表
第一章 共培養(yǎng)模型的構(gòu)建及模型中細(xì)胞活性的測定
    引言
    1 材料和方法
        1.1 主要儀器和試劑
        1.2 共培養(yǎng)細(xì)胞基本情況與共培養(yǎng)分組
        1.3 細(xì)胞生長情況的測量
        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法
    2 結(jié)果
        2.1 共培養(yǎng)細(xì)胞生長狀況
        2.2 CCK-8法比較單獨(dú)培養(yǎng)與共培養(yǎng)細(xì)胞的生長情況
    3 討論
    4 小結(jié)
第二章 模型中肝細(xì)胞主要代謝相關(guān)酶基因表達(dá)情況
    引言
    1 材料和方法
        1.1 主要儀器與試劑
        1.2 細(xì)胞基本情況和共培養(yǎng)及單獨(dú)培養(yǎng)組別設(shè)置
        1.3 研究方法
        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法
    2 結(jié)果
        2.1 主要Ⅰ相代謝酶基因的表達(dá)情況
        2.2 主要Ⅱ相代謝酶基因的表達(dá)情況
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 共培養(yǎng)模型代謝活化能力的初步驗證
    引言
    1 材料和方法
        1.1 主要儀器與試劑
        1.2 細(xì)胞基本情況
        1.3 研究方法
        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法
    2 微核試驗結(jié)果
    3 討論
    4 小結(jié)
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述 HepaRG肝細(xì)胞的基本特征和應(yīng)用前景
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷及在學(xué)期間發(fā)表論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]體外肝臟3D模型在藥物肝毒性評價中的優(yōu)勢[J]. 盧賢歡,趙華琛,王雪,黃芝瑛,淡墨.  藥學(xué)學(xué)報. 2017(12)
[2]基于類器官3D培養(yǎng)和高內(nèi)涵成像的藥物肝毒性評價模型研究[J]. 李朋彥,李春雨,陸小華,石偉,高源,崔鶴蓉,李婷婷,柏兆方,肖小河,王韞芳,王伽伯.  藥學(xué)學(xué)報. 2017(07)
[3]不同基底硬度在調(diào)控HepaRG細(xì)胞分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞中的作用[J]. 李甲志,王冰潔,勞建樂,徐靜.  實用醫(yī)學(xué)雜志. 2017(11)
[4]體外與體內(nèi)肝細(xì)胞微核檢測方法研究[J]. 文海若,宋捷,陳高峰,齊乃松,李琛,耿興超,王雪.  中國新藥雜志. 2016(07)
[5]多細(xì)胞系胞質(zhì)分裂阻滯微核細(xì)胞組學(xué)試驗法的建立與應(yīng)用[J]. 文海若,淡墨,齊乃松,耿興超,王雪.  癌變·畸變·突變. 2015(04)

博士論文
[1]多器官人源細(xì)胞系共培養(yǎng)模型的建立與初步應(yīng)用[D]. 王磊.第二軍醫(yī)大學(xué) 2014



本文編號：3677467