Brachury基因?qū)π∈笈咛ブ信邔拥臉?gòu)建至關(guān)重要,Brachury基因突變雜合型的小鼠表現(xiàn)出短尾表型。BVP與FGF兩種信號通路在小鼠胚胎發(fā)育和骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone Marrow Mesendhynal StemCells（BMSCs））中可控制胚胎形成、骨骼發(fā)育等生理過程,Brachury基因與BVP和FGF信號通路相互作用可能導致了小鼠短尾表型的產(chǎn)生。1為了揭示在小鼠胚胎發(fā)育的過程中,Brachury基因突變對BMP信號通路產(chǎn)生的影響,實驗首先提取7.5dpc～12.5dpc野生型和突變型小鼠胚胎的RNA,通過RT-cPCR技術(shù),檢測分析兩種模型小鼠胚胎中的Brachury基因與BMP途徑中相關(guān)基因表達變化:（1）在野生型和突變型兩種小鼠胚胎中,Brachury的表達趨勢一致,9.5dpc達到峰值,但突變型表達量低于野生型;（2）Snad1、Snad5、Shad8、BMP2、BMP4、BMP7、RUNX2和SOX9的表達在野生型胚胎中自7.5dpc至125dpc未發(fā)生明顯變化,但在突變型胚胎中Shad1、Shad5、Shad8、BVP2和SOX9在9.5dpc表達量最高,其... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 Brachyury(T)概述
    1.2 與胚胎發(fā)育相關(guān)的信號通路
        1.2.1 BMP信號通路
        1.2.2 FGF信號通路
    1.3 骨髓間充質(zhì)干細胞的概述
    1.4 研究目的及意義
2 實驗部分
    2.1 實驗材料
    2.2 儀器設(shè)備
    2.3 試劑耗材
    2.4 試劑配制
3 實驗方法
    3.1 小鼠7.5dpc～12.5dpc胚胎發(fā)育過程中Brachyury以及BMP信號通路相關(guān)因子的表達研究
        3.1.1 小鼠75dpo~12.5dpo胚胎采集
        3.1.2 樣本基因組DNA、總RNA的提取
        3.1.3 目的片段擴增
        3.1.4 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳檢測
        3.1.5 PCR產(chǎn)物的回收與純化
        3.1.6 反轉(zhuǎn)錄
        3.1.7 RT-aPCR檢測基因的表達
    3.2 小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞中Brachyury以及BMP/FGF信號通路相關(guān)因子的表達研究
        3.2.1 BMSCs原代培養(yǎng)
        3.2.2 BMBCS傳代培養(yǎng)
        3.2.3 BMSCs生長曲線測定
        3.2.4 細胞總RNA的提取
        3.2.5 反轉(zhuǎn)錄
        3.2.6 PCR檢測干細胞標志基因OCT4、SOX2及NANOG的表達
        3.2.7 小鼠BMSCs體外定向誘導分化
        3.2.8 小鼠BMSCs表面抗原鑒定
        3.2.9 Brachyury及BVP/FGF信號通路相關(guān)基因受到不同濃度FGFR3抑制劑抑制后在Mut型小鼠BMSCs中的表達
4 實驗結(jié)果分析
    4.1 小鼠7.5dpc～12.5dpc胚胎發(fā)育過程中Brachyury以及BMP信號通路相關(guān)因子的表達研究
        4.1.1 小鼠7.5dpc～12.5dpc胚胎采集
        4.1.2 Brachyury基因定點突變模型小鼠基因型鑒定
        4.1.3 總RNA的提取
        4.1.4 Brachyury在WT型和Mut型小鼠胚胎中的表達
        4.1.5 WT型和Mut型小鼠胚胎中BVP信號通路相關(guān)基因的表達
    4.2 小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞中Brachyury以及BVP/FGF信號通路相關(guān)因子的表達研究
        4.2.1 BMSCs的細胞形態(tài)
        4.2.2 BMSCs的生長曲線
        4.2.3 PCR檢測OCT4、SOX2及NANOG的表達
        4.2.4 成脂誘導分化及鑒定
        4.2.5 成骨誘導分化及鑒定
        4.2.6 神經(jīng)樣細胞誘導分化及鑒定
        4.2.7 流式細胞術(shù)檢測日BMSCs細胞表面標志抗原的表達
        4.2.8 Brachyury及BMP/FGF信號通路相關(guān)基因受到不同濃度FGFR3抑制劑抑制后在Mut型小鼠BMSCs中的表達
5 討論
    5.1 Brachyury基因定點突變模型小鼠的重要作用
    5.2 小鼠胚胎中Brachyury對BMP信號通路的作用
    5.3 FGF信號通路在BMSCs向軟骨分化過程中的作用
    5.4 Brachyury在BMSCs軟骨分化中的作用
    5.5 Brachyury對BMP和FGF信號通路的作用
    5.6 Brachyury與BMP/Wnt/FGF信號通路的關(guān)系
6 結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]小鼠MSCs的分離培養(yǎng)與體外多潛能分化的研究[D]. 趙興.青島農(nóng)業(yè)大學 2007



本文編號：3676879