線粒體是真核生物體內(nèi)產(chǎn)生ATP的主要場所,其基因組（mtDNA）編碼的蛋白是構(gòu)成線粒體呼吸鏈復(fù)合體的重要亞基。PPR蛋白是指含有兩個及以上串聯(lián)重復(fù)的類PPR模體的蛋白質(zhì),而類PPR模體則是由35個氨基酸殘基組成的結(jié)構(gòu)域。粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）中Ppr10蛋白對線粒體的翻譯至關(guān)重要。前期的研究表明在含有線粒體內(nèi)含子的背景下（yHL6381）,ppr10基因（Δppr10）的缺失影響了線粒體基因組編碼的RNA水平,而且在不同程度上影響了線粒體基因組編碼的蛋白的合成。因此,本文主要探究Ppr10蛋白是如何參與線粒體基因組翻譯的。P3是不含線粒體內(nèi)含子的菌株,其mtDNA編碼的mRNAs不需要內(nèi)含子的剪接。這更能幫助我們詮釋Ppr10蛋白在線粒體中發(fā)揮的功能。粟酒裂殖酵母的mtDNA僅包含三個內(nèi)含子,cox1中有2個I型內(nèi)含子分別是cox1 I 1b和cox1 I 2b,cob1中有1個II型內(nèi)含子為cob1 I 1。cox1 I 1b編碼DNA核酸內(nèi)切酶以及成熟酶,cox1 I 2b編碼DNA核酸內(nèi)切酶;cob1 I 1編碼的蛋白具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性和... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 線粒體的簡介
        1.1.1 線粒體結(jié)構(gòu)與功能
        1.1.2 線粒體基因組
        1.1.3 線粒體基因組編碼的內(nèi)含子剪接
        1.1.4 線粒體基因組編碼的mRNAs的翻譯
    1.2 PPR蛋白的介紹
        1.2.1 PPR蛋白的定義及其分布
        1.2.2 PPR蛋白的功能
    1.3 模式生物—粟酒裂殖酵母
    1.4 本課題的研究內(nèi)容和方法
        1.4.1 本課題的研究內(nèi)容
        1.4.2 本課題的研究方法
第二章 在P3 菌株中Ppr10 蛋白缺失后表型的研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 所用菌株
        2.1.2 實驗試劑與材料
        2.1.3 培養(yǎng)基及試劑配制
        2.1.4 所用引物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 構(gòu)建Δppr10/P3 菌株
        2.2.2 P3 菌株和Δppr10/P3 菌株的點圈實驗
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 Δppr10/P3 菌株的構(gòu)建
        2.3.2 ppr10 缺失菌的表現(xiàn)研究
    2.4 討論
第三章 粟酒裂殖酵母中ppr10 基因的缺失對線粒體基因組編碼的cox1和cob1 的內(nèi)含子剪接的影響
    3.1 實驗材料
        3.1.1 所用菌株
        3.1.2 實驗試劑與材料
        3.1.3 培養(yǎng)基及試劑配制
        3.1.4 所用引物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 試劑盒提取總RNA
        3.2.2 RNA的完整性檢測
        3.2.3 cDNA模板的獲得
        3.2.4 PCR擴(kuò)增及檢測
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 RNA的完整性檢測
        3.3.2 Ppr10 蛋白影響cox1和cob1 的內(nèi)含子剪接
    3.4 討論
第四章 在P3 菌株中ppr10 基因的缺失不影響cox1和cob1的mRNAs水平
    4.1 實驗材料
        4.1.1 所用菌株
        4.1.2 實驗試劑與材料
        4.1.3 培養(yǎng)基及試劑配制
        4.1.4 所用引物
    4.2 實驗方法
        4.2.1 qRT-PCR檢測線粒體基因組的轉(zhuǎn)錄水平
        4.2.2 Northern blot檢測線粒體基因組編碼的cox1和cob1 mRNAs累積水平
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 RNA的完整性檢測
        4.3.2 在不含線粒體內(nèi)含子的遺傳背景下,ppr10 的缺失不影響cox1和cob1的mRNAs的水平
    4.4 討論
第五章 在P3 菌株中ppr10 基因的缺失對線粒體蛋白翻譯的影響
    5.1 實驗材料
        5.1.1 所用菌株
        5.1.2 實驗試劑與材料
        5.1.3 培養(yǎng)基及試劑配制
    5.2 實驗方法
        5.2.1 體內(nèi)[~(35)S]-Protein Labeling檢測線粒體蛋白合成水平
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 Ppr10 蛋白影響了線粒體蛋白合成水平
    5.4 討論
第六章 在P3 菌株中ppr10 基因的缺失對線粒體蛋白穩(wěn)態(tài)水平的影響
    6.1 實驗材料
        6.1.1 所用菌株
        6.1.2 實驗試劑與材料
        6.1.3 培養(yǎng)基及試劑配制
    6.2 實驗方法
        6.2.1 粟酒裂殖酵母線粒體粗提取
        6.2.2 BCA法測定線粒體蛋白濃度
        6.2.3 線粒體樣品處理方法
        6.2.4 免疫印跡分析實驗
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 粟酒裂殖酵母細(xì)胞壁酶解圖
        6.3.2 粟酒裂殖酵母線粒體蛋白濃度測定
        6.3.3 ppr10 的缺失導(dǎo)致線粒體蛋白的表達(dá)量下降
    6.4 討論
全文討論與總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄一 菌種與質(zhì)粒
附錄二 實驗儀器
在讀期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3676729