發(fā)布時(shí)間：2022-08-12 19:29

　　硫元素是參與生命活動(dòng)的重要非金屬元素之一。硫酸鹽進(jìn)入細(xì)胞后,由ATP硫酸化酶（ATP sulfurylase）催化生成腺苷-5’-磷腺硫酸（Adenosine-5’-phosphorus sulfate,APS）,APS在APS還原酶的催化下生成亞硫酸,或者在APS激酶催化下生成3’-磷酸-腺苷5’-磷酰硫酸（3’-phosphoadenosine 5’-phosphosulfate,PAPS）。PAPS是合成硫代葡萄糖苷的原料之一,也是大規(guī)模合成肝素類多糖的一個(gè)關(guān)鍵原料,是胞內(nèi)硫酸化反應(yīng)的唯一硫酸根供體。硫酸轉(zhuǎn)移酶以PAPS為底物硫酸化生成磺酸物,其副產(chǎn)物為3’,5’-二磷酸腺苷（3’,5’-biphosphate adenosine,PAP）,生成的PAP在3’腺苷酸酶的催化下生成單磷酸腺苷AMP和無(wú)機(jī)磷酸。PAPS在生物材料中含量甚微,商品化PAPS價(jià)格貴且純度低。本研究以PAP/PAPS結(jié)合蛋白為工具,建立了從生物材料中純化和富集PAPS的方法,并進(jìn)行了定量分析。酵母3’,5’二磷酸核苷酸酶（3’,5’bisphosphate nucleotidase,BPNT或者HAL2）可... 

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1 硫酸鹽的同化代謝
        1.1 硫的生物學(xué)功能
        1.2 硫同化途徑
    2 PAPS的合成、運(yùn)輸及鑒定分析
        2.1 PAPS胞內(nèi)合成及運(yùn)輸
        2.2 PAPS的生物學(xué)作用
        2.3 PAPS的鑒定分析
    3 PUF蛋白相關(guān)研究
    4 研究目的及意義
第2章 麥芽糖結(jié)合蛋白-酵母3',5'二磷酸核苷酸酶融合蛋白表達(dá)體系的構(gòu)建及應(yīng)用
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 試驗(yàn)材料試劑
        2.2 表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3 MBP-HAL2 融合蛋白的表達(dá)及純化
        2.4 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)
        2.5 Braford法定量蛋白質(zhì)濃度
        2.6 融合蛋白結(jié)合PAP的分析
    3 結(jié)果與結(jié)論
        3.1 p MAL-HAL2 載體構(gòu)建
        3.2 p ET24-MBPHAL2 表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3 MBP-HAL2 融合蛋白的表達(dá)及純化
        3.4 融合蛋白MBP-HAL2 定量
        3.5 MBP-HAL2 融合蛋白結(jié)合PAP
    4 小結(jié)
第3章 PAP/PAPS體外富集及定量分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.2 細(xì)菌核苷酸的提取
        2.3 利用MBP-HAL2 融合蛋白富集PAP/PAPS
        2.4 PAP/PAPS定量分析
    3 結(jié)果
        3.1 硫酸鹽處理影響大腸桿菌核苷酸量
        3.2 富集樣品中PAP/PAPS的定量分析
    4 小結(jié)
第4章 PAP/PAPS胞內(nèi)濃度調(diào)節(jié)的初探
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        2.2 構(gòu)建His9-PUF表達(dá)體系
        2.3 細(xì)菌生長(zhǎng)曲線測(cè)定
        2.4 構(gòu)建p ETDuet-PUF和 p ET24a-Cys Q共表達(dá)體系
        2.5 PUF蛋白R(shí)NA結(jié)合域與目標(biāo)RNA片段的互作分析
    3 結(jié)果
        3.1 PUF12的誘導(dǎo)表達(dá)沒(méi)有影響大腸桿菌的生長(zhǎng)
        3.2 PUF12 的誘導(dǎo)表達(dá)沒(méi)有影響大腸桿菌Cys Q蛋白質(zhì)的表達(dá)
        3.3 PUF12 的誘導(dǎo)表達(dá)沒(méi)有影響大腸桿菌Cys Q的轉(zhuǎn)錄
        3.4 PUF12與目標(biāo)寡核苷酸的互作具有核酸長(zhǎng)度依賴性
    4 結(jié)論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3676461