在模式真菌構(gòu)巢曲霉中,FlbA蛋白位于分生孢子中心調(diào)控途徑上游,對(duì)分生孢子的形成起激活作用.研究以1株實(shí)驗(yàn)室篩選的高產(chǎn)洛伐他汀棒曲霉Ac-32專利菌株的基因組為模板,克隆分生孢子發(fā)育相關(guān)基因flbA,用雙接頭PCR法構(gòu)建flbA基因敲除盒,用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法構(gòu)建棒曲霉轉(zhuǎn)化子庫,依據(jù)轉(zhuǎn)化子表型特征和分子特征鑒定flbA基因缺失突變株.結(jié)果表明:flbA基因全長(zhǎng)為2 208 bp,翻譯對(duì)應(yīng)的氨基酸為734個(gè),理論分子量和等電點(diǎn)分別為78 798.75 Da和8.64;棒曲霉與構(gòu)巢曲霉flbA基因序列同源性為69.9%,氨基酸序列的同源性為76.6%;構(gòu)建了flbA基因敲除盒和敲除載體,獲得了258株棒曲霉轉(zhuǎn)化子,經(jīng)鑒定得到了1株flbA基因缺失突變株.研究成果為后續(xù)探討棒曲霉flbA基因功能提供了材料,并奠定了理論基礎(chǔ). 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材 料
        1.1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 主要培養(yǎng)基
    1.2 方 法
        1.2.1 棒曲霉Ac-32菌株的培養(yǎng)和基因組DNA的提取
        1.2.2 棒曲霉Ac-32菌株flbA基因的克隆、測(cè)序和信息學(xué)分析
            1)flbA基因的克隆和測(cè)序:
            2)flbA基因的信息學(xué)分析:
        1.2.3 棒曲霉Ac-32菌株flbA基因敲除盒的構(gòu)建
            1)flbA基因5′端、3′端側(cè)翼序列和hph基因片段的擴(kuò)增和測(cè)序
            2)flbA基因的5′端、3′端側(cè)翼序列和hph基因片段的連接
        1.2.4 flbA基因敲除載體的構(gòu)建和農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化
        1.2.5 敲除載體轉(zhuǎn)化棒曲霉Ac-32菌株和flbA基因缺失突變株的篩選
2 結(jié)果與分析
    2.1 棒曲霉Ac-32菌株flbA基因的序列和同源性
        2.1.1 flbA基因的克隆和序列
        2.1.2 flbA基因核苷酸序列和對(duì)應(yīng)氨基酸的同源性
    2.2 棒曲霉Ac-32菌株flbA基因敲除盒的構(gòu)建
        2.2.1 flbA-5′,flbA-3′和hph基因片段的擴(kuò)增結(jié)果
        2.2.2 flbA-5′,flbA-3′和hph基因片段的連接
    2.3 棒曲霉Ac-32菌株flbA基因敲除載體的構(gòu)建和農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化
    2.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)敲除載體(pKO1B-flbA)轉(zhuǎn)化棒曲霉Ac-32菌株
    2.5 ΔflbA-86基因缺失株表達(dá)水平的鑒定
3 討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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