T1脂肪酶來(lái)源于 Geobacillus zalihae 菌株,常作為生物催化劑廣泛應(yīng)用于各領(lǐng)域。為了綜合改善T1脂肪酶的酶學(xué)性質(zhì),前期通過(guò)對(duì)該酶蓋子結(jié)構(gòu)進(jìn)行理性設(shè)計(jì)得到3個(gè)效果較好的突變體L188M、A190L、A190Y,在此基礎(chǔ)上,將單點(diǎn)突變體進(jìn)行組合得到L188M/A190L和L188M/A190Y兩個(gè)復(fù)合突變體。在該實(shí)驗(yàn)中對(duì)突變體脂肪酶酶學(xué)性質(zhì)展開(kāi)研究,同時(shí)將單點(diǎn)與組合突變效果進(jìn)行比較。結(jié)果顯示野生型及突變體最適pH均為9.0,復(fù)合突變體的最適溫度提高5℃。單點(diǎn)突變及組合突變均使T1脂肪酶的酶學(xué)性質(zhì)得到不同程度的改善,且復(fù)合突變體效果更顯著。組合突變體使脂肪酶的溫度、pH穩(wěn)定性顯著提高,L188M/A190L對(duì)于有機(jī)溶劑二甲基亞砜及正十六烷的耐受性為野生型的1.88倍和2.73倍,L188M/A190Y為野生型的1.96倍和2.58倍。此外,對(duì)C16和C18底物的選擇性也明顯增強(qiáng),L188M/A190L為野生型的1.65和2.7倍,L188M/A190Y為野生型的1.5倍和2.25倍。該研究成果在一定程度上拓寬了T1脂肪酶的應(yīng)用前景,同時(shí)為其他脂肪酶的改造提供了一定理論依據(jù)。 

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要模擬與分析軟件
        1.1.2 菌種及質(zhì)粒
        1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    1.2 方法
        1.2.1 突變體的虛擬篩選
        1.2.2 T1脂肪酶突變體構(gòu)建
        1.2.3 T1脂肪酶突變體表達(dá)及純化
        1.2.4 T1脂肪酶突變體最適溫度及溫度穩(wěn)定性
        1.2.5 T1脂肪酶突變體最適pH及pH穩(wěn)定性
        1.2.6 T1脂肪酶突變體的有機(jī)溶劑耐受性
        1.2.7 T1脂肪酶突變體的金屬離子耐受性
        1.2.8 T1脂肪酶突變體的底物選擇性
2 結(jié)果
    2.1 突變體的虛擬篩選
    2.2 T1脂肪酶突變體的表達(dá)及純化鑒定
    2.3 T1脂肪酶突變體最適溫度及溫度穩(wěn)定性
    2.4 T1脂肪酶突變體的最適pH及pH穩(wěn)定性
    2.5 T1脂肪酶突變體的有機(jī)溶劑耐受性
    2.6 T1脂肪酶突變體的金屬離子耐受性
    2.7 T1脂肪酶突變體的底物選擇性
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]金屬離子對(duì)重組深淵滕黃單胞菌低溫α-淀粉酶LamA的活性和穩(wěn)定性影響[J]. 孫清揚(yáng),張靜靜,李冰清,王巖,張曉華.  微生物學(xué)通報(bào). 2019(11)
[2]基于氨基酸序列和模擬結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的研究進(jìn)展[J]. 易華偉,唐曉峰.  生物技術(shù)通報(bào). 2017(04)
[3]固定化嗜熱嗜堿土芽孢桿菌T1脂肪酶的制備及其催化特性研究[J]. 汪璞,王方華,唐慶蕓,王永華,楊博.  現(xiàn)代食品科技. 2015(05)
[4]脂肪酶及其在食品工業(yè)中的應(yīng)用(英文)[J]. WANG Ting,QIN Gang(College of Food Science,Southwest University,Chongqing 400716 China).  肉類(lèi)研究. 2010(09)
[5]黑曲霉脂肪酶蓋子結(jié)構(gòu)域突變對(duì)其活性的影響[J]. 薛龍吟,林瑞鳳,舒正玉,黃建忠.  生物技術(shù)通報(bào). 2010(02)

碩士論文
[1]疏棉狀嗜熱絲孢菌脂肪酶在畢赤酵母表面展示[D]. 黃奎.華南理工大學(xué) 2017
[2]擴(kuò)展青霉脂肪酶“蓋子”結(jié)構(gòu)域突變對(duì)其活性影響的研究[D]. 林瑞鳳.福建師范大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3664581