由抗生素引發(fā)的多重耐藥菌導(dǎo)致人類某些疾病無(wú)法治愈而引起患者死亡,所以有關(guān)抗生素替代品-細(xì)菌素的研究成為目前科學(xué)領(lǐng)域的焦點(diǎn),而限制細(xì)菌素廣泛應(yīng)用的原因在于已發(fā)現(xiàn)的大部分細(xì)菌素存在抑菌譜較窄的問(wèn)題。該問(wèn)題可以從以下兩個(gè)方面解決:第一,發(fā)掘更多廣譜細(xì)菌素,豐富細(xì)菌素的種類;第二,研究致病菌耐細(xì)菌素機(jī)制,為制定預(yù)防或減少耐藥性策略提供研究基礎(chǔ)。對(duì)于第一個(gè)方面,通過(guò)從酸面團(tuán)中篩選產(chǎn)廣譜細(xì)菌素的乳酸菌,從而為獲得廣譜細(xì)菌素提供豐富菌種。對(duì)于第二個(gè)方面,選取具有代表性的細(xì)菌素-大腸桿菌素（Colicin）,研究病原菌耐Colicin機(jī)制。雖然Colicin E3、E4、E5、E6和Colicin D通過(guò)切斷病原菌的t-RNA和16S rRNA來(lái)抑制蛋白質(zhì)合成,最終殺死病原菌,但是含有rtcBA操縱子的病原菌-大腸桿菌MG1655通過(guò)上調(diào)RtcB蛋白（連接酶）和RtcA蛋白（環(huán)化酶）的表達(dá)可耐受Colicin。而rtcBA操縱子轉(zhuǎn)錄需要RtcR蛋白激活Eσ⁵⁴全酶(RNA聚合酶和σ⁵⁴因子)才能轉(zhuǎn)錄rtcB和rtcA基因,所以本研究通過(guò)研究RtcR蛋白激活轉(zhuǎn)... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)對(duì)照表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 酸面團(tuán)
        1.1.1 酸面團(tuán)的種類
        1.1.2 酸面團(tuán)的細(xì)菌多樣性
        1.1.3 細(xì)菌多樣性的研究方法
    1.2 細(xì)菌素
        1.2.1 乳酸菌細(xì)菌素的種類
        1.2.2 產(chǎn)細(xì)菌素的乳酸菌種類
        1.2.3 細(xì)菌素的作用機(jī)制
        1.2.4 抗細(xì)菌素的作用機(jī)制
    1.3 細(xì)菌基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究進(jìn)展
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件
        1.3.2 bEBPs信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制
        1.3.3 bEBPs的種類
        1.3.4 bEBPs的結(jié)構(gòu)
    1.4 RtcR蛋白激活rtcBA操縱子轉(zhuǎn)錄相關(guān)研究
        1.4.1 rtcBA操縱子的功能
        1.4.2 bEBPs激活σ~(54)因子轉(zhuǎn)錄的過(guò)程
        1.4.3 RtcR蛋白的相關(guān)研究
    1.5 研究目的與意義
    1.6 研究?jī)?nèi)容
    1.7 技術(shù)路線
第二章 酸面團(tuán)細(xì)菌多樣性
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 樣品采集
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要設(shè)備和儀器
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 酸面團(tuán)的理化特性
        2.2.2 酸面團(tuán)細(xì)菌多樣性分析
        2.2.3 酸面團(tuán)細(xì)菌多樣性與代謝途徑的差異分析
        2.2.4 數(shù)據(jù)分析
        2.2.5 數(shù)據(jù)共享
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 酸面團(tuán)理化特性
        2.3.2 測(cè)序覆蓋率和細(xì)菌多樣性估計(jì)
        2.3.3 酸面團(tuán)的細(xì)菌多樣性
        2.3.4 30個(gè)酸面團(tuán)共有OTU分析
        2.3.5 不同地區(qū)酸面團(tuán)細(xì)菌多樣性的差異
        2.3.6 確立引起酸面團(tuán)細(xì)菌多樣性差異的影響因素
        2.3.7 中國(guó)酸面團(tuán)細(xì)菌功能代謝多樣性
        2.3.8 酸面團(tuán)采集地、理化特性、細(xì)菌多樣性和代謝途徑間的相關(guān)性
    2.4 小結(jié)
第三章 酸面團(tuán)中產(chǎn)細(xì)菌素乳酸菌的分離
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 乳酸菌分離源
        3.1.2 試驗(yàn)菌株
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要培養(yǎng)基
        3.1.5 主要設(shè)備和儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 酸面團(tuán)中乳酸菌的分離
        3.2.2 產(chǎn)細(xì)菌素乳酸菌的分離
        3.2.3 最佳硫酸銨飽和度和最佳抑菌效果菌株的確定
        3.2.4 菌種鑒定
        3.2.5 抑菌譜的測(cè)定
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 產(chǎn)細(xì)菌素乳酸菌的分離
        3.3.2 最佳抑菌效果菌株的確定及菌種鑒定
        3.3.3 抑菌譜的測(cè)定
    3.4 小結(jié)
第四章 RtcR蛋白、IHF蛋白和σ~(54)因子的克隆表達(dá)與純化
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 試驗(yàn)菌株及質(zhì)粒
        4.1.2 主要試劑和培養(yǎng)基
        4.1.3 試驗(yàn)主要設(shè)備和儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 RtcR蛋白基因的克隆
        4.2.2 RtcR蛋白、IHF蛋白和σ~(54)因子的表達(dá)與純化
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 RtcR蛋白基因的克隆
        4.3.2 RtcR蛋白、IHF蛋白和σ~(54)因子的純化
    4.4 小結(jié)
第五章 RtcR蛋白激活rtcBA操縱子轉(zhuǎn)錄機(jī)制
    5.1 試驗(yàn)材料
        5.1.1 試驗(yàn)用蛋白
        5.1.2 主要試劑和培養(yǎng)基
        5.1.3 主要設(shè)備和儀器
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 RtcR蛋白體外激活rtcBA啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)
        5.2.2 Full length RtcR和?CARF-RtcR在溶液中的存在形式
        5.2.3 ?CARF-RtcR蛋白與rtcBA啟動(dòng)子親和力常數(shù)Kd的測(cè)定
        5.2.4 IHF蛋白與194 bp rtcBA啟動(dòng)子親和力常數(shù)Kd測(cè)定
        5.2.5 透射電鏡觀察?CARF-RtcR蛋白多聚體的形成
        5.2.6 ?CARF-RtcR蛋白基礎(chǔ)ATP酶水解速率的測(cè)定
        5.2.7 ?CARF-RtcR蛋白與轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子σ~(54)蛋白的復(fù)合物形成
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 RtcR體外轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)
        5.3.2 full length RtcR蛋白和?CARF-RtcR蛋白的存在形式
        5.3.3 ?CARF-RtcR與rtcBA啟動(dòng)子親和力常數(shù)Kd測(cè)定
        5.3.4 IHF蛋白與194 bp rtcBA啟動(dòng)子親和力常數(shù)Kd測(cè)定
        5.3.5 電鏡觀察負(fù)染?CARF-RtcR蛋白多聚體的形成
        5.3.6 ?CARF-RtcR蛋白的基礎(chǔ)ATP酶水解速率測(cè)定
        5.3.7 ?CARF-RtcR蛋白與σ~(54)因子的復(fù)合物形成
    5.4 小結(jié)
第六章 RtcR蛋白的結(jié)構(gòu)解析
    6.1 試驗(yàn)材料
        6.1.1 試驗(yàn)質(zhì)粒
        6.1.2 主要試劑和培養(yǎng)基
        6.1.3 試驗(yàn)主要設(shè)備和儀器
    6.2 試驗(yàn)方法
        6.2.1 天然?CARF-RtcR蛋白(Native?CARF-RtcR)結(jié)晶
        6.2.2 重金屬浸泡?CARF-RtcR蛋白晶體
        6.2.3 硒代蛋氨酸?CARF-RtcR蛋白結(jié)晶
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 天然?CARF-RtcR蛋白結(jié)晶
        6.3.2 天然?CARF-RtcR蛋白晶體的鑒定及檢測(cè)
        6.3.3 天然?CARF-RtcR蛋白結(jié)晶條件的優(yōu)化
        6.3.4 天然?CARF-RtcR蛋白晶體衍射及三維結(jié)構(gòu)解析
        6.3.5 重金屬浸泡?CARF-RtcR蛋白晶體
        6.3.6 硒代蛋氨酸法解析?CARF-RtcR蛋白結(jié)構(gòu)
    6.4 小結(jié)
第七章 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)與展望
    7.1 結(jié)論
    7.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    7.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3662265