發(fā)布時(shí)間：2022-07-02 14:32

　　啟動(dòng)子是控制基因轉(zhuǎn)錄的重要元件,也是合成生物學(xué)研究和細(xì)胞工廠設(shè)計(jì)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。糖酵解途徑和三羧酸循環(huán)是糖類分解代謝的中心代謝,受到包括啟動(dòng)子強(qiáng)度在內(nèi)的嚴(yán)格調(diào)控。為了篩選一系列能滿足合成生物學(xué)研究和細(xì)胞工廠設(shè)計(jì)需要的不同強(qiáng)度的內(nèi)源性組成型啟動(dòng)子,利用報(bào)告基因——紅色熒光蛋白m Cherry和在線分析軟件,系統(tǒng)研究了大腸桿菌糖酵解和三羧酸循環(huán)中27個(gè)啟動(dòng)子的強(qiáng)度和核心結(jié)構(gòu)元件。結(jié)果表明:這些啟動(dòng)子的強(qiáng)度范圍變化很大,最強(qiáng)啟動(dòng)子Pgap A的強(qiáng)度是最弱啟動(dòng)子Pacn A強(qiáng)度的43. 6倍;啟動(dòng)子的-10序列和-35序列與它們的一致序列也不完全相同,兩者之間的距離為17±3bp;但是,啟動(dòng)子的強(qiáng)度和啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特征基本一致。應(yīng)用最強(qiáng)啟動(dòng)子Pgap A在重組大腸桿菌DH5αΔpck中分別表達(dá)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因和丙酮酸激酶基因,它們的酶活性分別提高了0. 32和1. 57倍,檸檬酸產(chǎn)量也提高了124. 7%和75. 5%。這些不同強(qiáng)度的啟動(dòng)子為大腸桿菌的合成生物學(xué)研究和細(xì)胞工廠設(shè)計(jì)奠定了一定的基礎(chǔ)。 

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【部分圖文】：

重組質(zhì)粒p ET-promoter-RFP的構(gòu)建過(guò)程

重組質(zhì)粒p ET-promoter-RFP酶切驗(yàn)證

不同基因啟動(dòng)子相對(duì)于啟動(dòng)子Pacn A的相對(duì)強(qiáng)度

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]mCherry紅色熒光標(biāo)記乳酸菌的融合表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建及應(yīng)用[J]. 陳英,王培娟,張文君,楊丘旭,楊瑤.  生物工程學(xué)報(bào). 2019(03)



本文編號(hào)：3654536