目的:探討不同靈長類動物SAMHD1蛋白的抗病毒、抑制逆轉錄轉座子LINE-1和減弱干擾素產(chǎn)生信號通路等作用,為靈長類動物SAMHD1蛋白的進一步研究提供依據(jù)。方法:構建穩(wěn)定表達SAMHD1蛋白的U937細胞系,以空載體構建的細胞作為空白對照組,以穩(wěn)定表達不同靈長類動物SAMHD1蛋白的U937細胞系為實驗組。經(jīng)佛波酯刺激分化成巨噬樣細胞后,采用流式細胞術分析HIV-1-GFP病毒在不同實驗組中的感染率。以單獨轉染SAMHD1表達質(zhì)粒的HEK293T細胞為對照組,共同轉染SAMHD1與HIV-2/SIV Vpx表達質(zhì)粒的細胞為實驗組,轉染后48 h收獲細胞,采用蛋白印跡實驗檢測SAMHD1蛋白水平,免疫熒光檢測方法觀察不同SAMHD1蛋白的細胞內(nèi)定位。以單獨轉染LINE-1-GFP報告質(zhì)粒的HEK293T細胞作為對照組,以共同轉染LINE-1-GFP與SAMHD1表達質(zhì)粒的細胞為實驗組,采用流式細胞術檢測GFP陽性細胞率。以單獨轉染IFN-luc報告質(zhì)粒的HEK293T細胞為對照組,共同轉染IFN-luc與SAMHD1表達質(zhì)粒的細胞為實驗組,采用化學發(fā)光儀檢測HEK293T細胞中熒光素... 

【文章來源】：吉林大學吉林省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 背景知識
        1.1.1 靈長類動物與猴免疫缺陷病毒
        1.1.2 限制性因子SAMHD1 的結構與發(fā)現(xiàn)
        1.1.3 限制性因子SAMHD1 的抗病毒作用
        1.1.4 限制性因子SAMHD1 的細胞學功能
        1.1.5 病毒蛋白Vpx與限制性因子SAMHD1 競爭性進化關系.
    1.2 研究目的
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料、儀器與試劑
        2.1.1 實驗所用細胞系
        2.1.2 實驗所用菌株
        2.1.3 實驗所用毒株
        2.1.4 實驗所用質(zhì)粒
        2.1.5 實驗所用抗體
        2.1.6 實驗所用儀器
        2.1.7 實驗所用主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 LB液體以及固體培養(yǎng)基的制備
        2.2.2 感受態(tài)的制備
        2.2.3 質(zhì)粒擴增
        2.2.4 細胞復蘇、培養(yǎng)與凍存
        2.2.5 PEI轉染法
        2.2.6 蛋白免疫印記Western Blot
        2.2.7 病毒的包裝與純化
        2.2.8 建立SAMHD1 穩(wěn)定表達細胞系
        2.2.9 靈長類SAMHD1 蛋白的細胞內(nèi)定位-免疫熒光
        2.2.10 靈長類SAMHD1 蛋白對LINE-1 轉座的抑制
        2.2.11 靈長類SAMHD1 蛋白對干擾素產(chǎn)生信號通路的影響
        2.2.12 HIV-1-GFP病毒滴度檢測
        2.2.13 統(tǒng)計學分析
第3章 實驗結果與討論
    3.1 靈長類動物SAMHD1 抗病毒活性
    3.2 慢病毒蛋白Vpx誘導靈長類動物的降解作用
    3.3 靈長類SAMHD1 蛋白的細胞內(nèi)定位
    3.4 靈長類動物SAMHD1對LINE-1 轉座活性的抑制
    3.5 靈長類動物SAMHD1 抑制免疫激活作用
    3.6 討論
結論
參考文獻
作者簡介及在碩士期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3643384