目的:探討不同靈長(zhǎng)類動(dòng)物SAMHD1蛋白的抗病毒、抑制逆轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子LINE-1和減弱干擾素產(chǎn)生信號(hào)通路等作用,為靈長(zhǎng)類動(dòng)物SAMHD1蛋白的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。方法:構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)SAMHD1蛋白的U937細(xì)胞系,以空載體構(gòu)建的細(xì)胞作為空白對(duì)照組,以穩(wěn)定表達(dá)不同靈長(zhǎng)類動(dòng)物SAMHD1蛋白的U937細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)組。經(jīng)佛波酯刺激分化成巨噬樣細(xì)胞后,采用流式細(xì)胞術(shù)分析HIV-1-GFP病毒在不同實(shí)驗(yàn)組中的感染率。以單獨(dú)轉(zhuǎn)染SAMHD1表達(dá)質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞為對(duì)照組,共同轉(zhuǎn)染SAMHD1與HIV-2/SIV Vpx表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,轉(zhuǎn)染后48 h收獲細(xì)胞,采用蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SAMHD1蛋白水平,免疫熒光檢測(cè)方法觀察不同SAMHD1蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位。以單獨(dú)轉(zhuǎn)染LINE-1-GFP報(bào)告質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞作為對(duì)照組,以共同轉(zhuǎn)染LINE-1-GFP與SAMHD1表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)GFP陽性細(xì)胞率。以單獨(dú)轉(zhuǎn)染IFN-luc報(bào)告質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞為對(duì)照組,共同轉(zhuǎn)染IFN-luc與SAMHD1表達(dá)質(zhì)粒的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,采用化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)HEK293T細(xì)胞中熒光素... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 背景知識(shí)
        1.1.1 靈長(zhǎng)類動(dòng)物與猴免疫缺陷病毒
        1.1.2 限制性因子SAMHD1 的結(jié)構(gòu)與發(fā)現(xiàn)
        1.1.3 限制性因子SAMHD1 的抗病毒作用
        1.1.4 限制性因子SAMHD1 的細(xì)胞學(xué)功能
        1.1.5 病毒蛋白Vpx與限制性因子SAMHD1 競(jìng)爭(zhēng)性進(jìn)化關(guān)系.
    1.2 研究目的
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞系
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)所用菌株
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用毒株
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)所用質(zhì)粒
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)所用抗體
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)所用儀器
        2.1.7 實(shí)驗(yàn)所用主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 LB液體以及固體培養(yǎng)基的制備
        2.2.2 感受態(tài)的制備
        2.2.3 質(zhì)粒擴(kuò)增
        2.2.4 細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)與凍存
        2.2.5 PEI轉(zhuǎn)染法
        2.2.6 蛋白免疫印記Western Blot
        2.2.7 病毒的包裝與純化
        2.2.8 建立SAMHD1 穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系
        2.2.9 靈長(zhǎng)類SAMHD1 蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位-免疫熒光
        2.2.10 靈長(zhǎng)類SAMHD1 蛋白對(duì)LINE-1 轉(zhuǎn)座的抑制
        2.2.11 靈長(zhǎng)類SAMHD1 蛋白對(duì)干擾素產(chǎn)生信號(hào)通路的影響
        2.2.12 HIV-1-GFP病毒滴度檢測(cè)
        2.2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
    3.1 靈長(zhǎng)類動(dòng)物SAMHD1 抗病毒活性
    3.2 慢病毒蛋白Vpx誘導(dǎo)靈長(zhǎng)類動(dòng)物的降解作用
    3.3 靈長(zhǎng)類SAMHD1 蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位
    3.4 靈長(zhǎng)類動(dòng)物SAMHD1對(duì)LINE-1 轉(zhuǎn)座活性的抑制
    3.5 靈長(zhǎng)類動(dòng)物SAMHD1 抑制免疫激活作用
    3.6 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介及在碩士期間所取得的科研成果
致謝



本文編號(hào)：3643384