發(fā)布時(shí)間：2022-02-17 23:17

　　利用國際上最新的兩種基于CRISPR/Cas9的BE3（Cytosine base editor,CBE）和ABE7.10（Adenine base editor,ABE）單堿基修飾技術(shù)對豬基因組靶基因位點(diǎn)進(jìn)行編輯效率的分析研究。設(shè)計(jì)、合成并構(gòu)建4個(gè)豬基因組靶基因位點(diǎn)gRNA表達(dá)載體,分別與CBE或ABE共轉(zhuǎn)染PK15細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)48 h,結(jié)合二代測序技術(shù)測定單堿基替換效率和indels發(fā)生率。結(jié)果表明,單堿基編輯系統(tǒng)BE3和ABE7.10對豬基因組靶位點(diǎn)堿基修飾的活性編輯窗口主要分別為5個(gè)核苷酸和4個(gè)核苷酸;兩套單堿基編輯系統(tǒng)主要對編輯窗口內(nèi)的目標(biāo)堿基進(jìn)行單堿基轉(zhuǎn)換而非indel;兩套單堿基編輯系統(tǒng)對豬基因組堿基置換有一定偏好性,其中CMAH、MC1R（1-2）、MC1R（2-1）基因編輯窗口內(nèi)C→T的效率分別為2.2%、0.4%和1.3%;豬GGTA、MSTN-2窗口內(nèi)A→G的效率分別為1.4%、1.4%。表明單堿基編輯系統(tǒng)BE3和ABE7.10均能夠?qū)ωi細(xì)胞的基因組靶位點(diǎn)序列進(jìn)行有效的單堿基置換。 

【文章來源】：湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,59(18)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細(xì)胞及載體
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 sg RNA設(shè)計(jì)及活性鑒定
        1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.2.3 靶向文庫構(gòu)建及測序
        1.2.4 測序數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 CRR-sg RNA表達(dá)載體構(gòu)建及活性驗(yàn)證結(jié)果
    2.2 靶向文庫構(gòu)建
    2.3 單堿基替換效率分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]An effective strategy to establish a male sterility mutant mini-library by CRISPR/Cas9-mediated knockout of anther-specific genes in rice[J]. Kun Ma,Jingluan Han,Yu Hao,Zhongfang Yang,Junyu Chen,Yao-Guang Liu,Qinlong Zhu,Letian Chen.  Journal of Genetics and Genomics. 2019(05)



本文編號：3630283