利用國際上最新的兩種基于CRISPR/Cas9的BE3（Cytosine base editor,CBE）和ABE7.10（Adenine base editor,ABE）單堿基修飾技術對豬基因組靶基因位點進行編輯效率的分析研究。設計、合成并構建4個豬基因組靶基因位點gRNA表達載體,分別與CBE或ABE共轉染PK15細胞,繼續(xù)培養(yǎng)48 h,結合二代測序技術測定單堿基替換效率和indels發(fā)生率。結果表明,單堿基編輯系統(tǒng)BE3和ABE7.10對豬基因組靶位點堿基修飾的活性編輯窗口主要分別為5個核苷酸和4個核苷酸;兩套單堿基編輯系統(tǒng)主要對編輯窗口內的目標堿基進行單堿基轉換而非indel;兩套單堿基編輯系統(tǒng)對豬基因組堿基置換有一定偏好性,其中CMAH、MC1R（1-2）、MC1R（2-1）基因編輯窗口內C→T的效率分別為2.2%、0.4%和1.3%;豬GGTA、MSTN-2窗口內A→G的效率分別為1.4%、1.4%。表明單堿基編輯系統(tǒng)BE3和ABE7.10均能夠對豬細胞的基因組靶位點序列進行有效的單堿基置換。 

【文章來源】：湖北農業(yè)科學. 2020,59(18)

【文章頁數】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細胞及載體
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 sg RNA設計及活性鑒定
        1.2.2 細胞轉染
        1.2.3 靶向文庫構建及測序
        1.2.4 測序數據分析
2 結果與分析
    2.1 CRR-sg RNA表達載體構建及活性驗證結果
    2.2 靶向文庫構建
    2.3 單堿基替換效率分析
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]An effective strategy to establish a male sterility mutant mini-library by CRISPR/Cas9-mediated knockout of anther-specific genes in rice[J]. Kun Ma,Jingluan Han,Yu Hao,Zhongfang Yang,Junyu Chen,Yao-Guang Liu,Qinlong Zhu,Letian Chen.  Journal of Genetics and Genomics. 2019(05)



本文編號：3630283