ROOT UV-B SENSITIVE4 （RUS4）是擬南芥DUF647蛋白家族的一個(gè)功能未知的成員。RUS1和RUS2曾經(jīng)報(bào)道和根UV-B-感應(yīng)途徑相關(guān)聯(lián),并在擬南芥早期幼苗形態(tài)發(fā)生和發(fā)育中發(fā)揮重要作用。為了探究RUS4的分子功能,本研究對(duì)RUS4蛋白進(jìn)行了亞細(xì)胞定位分析。首先,我們通過Gateway TOPO載體系統(tǒng),構(gòu)建了融合蛋白表達(dá)載體pMDC83-RUS4;然后,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花苞轉(zhuǎn)化法,獲得了轉(zhuǎn)化pMDC83-RUS4的轉(zhuǎn)基因擬南芥株系;對(duì)轉(zhuǎn)基因植物葉肉原生質(zhì)體的熒光顯微鏡觀察顯示,RUS4-GFP信號(hào)與葉綠體的自發(fā)熒光共定位,說明RUS4蛋白定位葉綠體中。該結(jié)果為進(jìn)一步研究RUS4的分子功能奠定了良好的基礎(chǔ)。 

【文章來源】：分子植物育種. 2020,18(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

pENTR/D-TOPO-RUS4入門載體的構(gòu)建

我們利用液氮凍融法將pMDC83-RUS4質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞EHA105中，在含有利福平50 mg/L和潮霉素50 mg/L的LB抗性平板上篩選陽性克隆。隨機(jī)挑取單克隆，液體培養(yǎng)，提取質(zhì)粒DNA，利用引物RUS4-F2和GFP-R對(duì)這些克隆進(jìn)行了PCR鑒定。結(jié)果顯示(圖4)，所有陽性克隆含有預(yù)期的重組質(zhì)粒DNA。圖3 p MDC83-RUS4植物表達(dá)載體的PCR鑒定

p MDC83-RUS4植物表達(dá)載體的PCR鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人工microRNAs對(duì)擬南芥At1g13770和At2g23470基因的特異沉默[J]. 李文超,趙淑清.  遺傳. 2012(03)
[2]擬南芥葉肉原生質(zhì)體分離條件的優(yōu)化[J]. 孫琳琳,佟少明,侯和勝.  植物生理學(xué)通訊. 2009(03)



本文編號(hào)：3613400