塞內(nèi)卡谷病毒（Seneca Valley virus,SVV）是小RNA病毒科（Picornaviridae）,塞內(nèi)卡病毒屬（Senecavirus）的唯一成員。2002年研究學(xué)者從人胚胎視網(wǎng)膜細(xì)胞（PER.C6）培養(yǎng)物的污染物中分離得到SVV-001,2007年首次報(bào)道了豬群SVV感染與豬特發(fā)性水皰病（Porcine Idiopathic Vesicular Disease,PIVD）有關(guān),隨后陸續(xù)在美國、巴西、中國、泰國、哥倫比亞和越南等國家也有SVV感染的相關(guān)報(bào)道。SVV感染主要引起豬口腔粘膜,鼻吻和冠狀水泡和潰瘍病變,然后造成跛行,厭食,嗜睡等癥狀;7日齡內(nèi)新生仔豬感染SVV的病死率約為30%至70%,時(shí)常伴有腹瀉癥狀。SVV的結(jié)構(gòu)蛋白在SVV感染以及產(chǎn)生中和性抗體的過程中起著至關(guān)重要的作用,但對于SVV的中和抗體的制備和研究卻沒有報(bào)道。本研究旨在制備SVV全病毒結(jié)構(gòu)蛋白的中和抗體并鑒定出中和表位,為探索SVV基因組結(jié)構(gòu)和功能,和利用中和抗體對SVV進(jìn)行免疫防治皆有深遠(yuǎn)意義。本研究以SVV-LNSY01-2017株為研究對象,用該純化的病毒免疫6周齡的BABL/C雌性小鼠,經(jīng)過... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

塞內(nèi)卡谷病毒粒子平面和三維結(jié)構(gòu)(ViralZone2015)

塞內(nèi)卡谷病毒中和性單克隆抗體制備及中和表位鑒定3圖1-2SVV基因組結(jié)構(gòu)（Segalesetal2016）Fig.1-2ThegenomestructureoftheSVV1.2.2.1前導(dǎo)蛋白L塞內(nèi)卡谷病毒的前導(dǎo)蛋白L全長含99個(gè)氨基酸，與同樣包含L蛋白的心病毒，肺炎病毒，狂犬病毒，柯布病毒，破骨病毒和細(xì)小病毒屬別不同。它的蛋白序列缺乏蛋白水解活動所需的催化殘基位點(diǎn)，既不含有“鋅指”構(gòu)象基序[C-x-H-x(6)-C-c(2)-C]，也不含有磷酸化酪氨酸基序[K-x(2)-E-x(2)-Y]（黃健強(qiáng)等2019），表明SVV的前導(dǎo)蛋白Ｌ可能具有獨(dú)特的功能，具體功能尚待確定。1.2.2.2病毒結(jié)構(gòu)蛋白P1病毒結(jié)構(gòu)蛋白P1可以被3C蛋白酶分解為三個(gè)亞基蛋白，依次為VP0、VP3和VP1，VP0蛋白成熟之后會分解為VP4蛋白和VP2蛋白，因此結(jié)構(gòu)蛋白VP4、VP2、VP3和VP1是形成病毒衣殼的主要單位，用于病毒衣殼的合成（Halesetal2008）。VP1、VP2和VP3蛋白在病毒結(jié)構(gòu)上形成正三角形，以20個(gè)這樣的正三角形組裝成正20面體，分布于衣殼外表面，剩余的VP4蛋白處于正20面體內(nèi)表面（ViralZone2015）。有研究顯示該三種蛋白親水性較高，更容易產(chǎn)生抗原表位，病毒侵入機(jī)體更容易誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，從而實(shí)現(xiàn)消滅入侵病毒的作用，因而這3種結(jié)構(gòu)蛋白在機(jī)體抵御SVV感染過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用（Maggiolietal2018）。結(jié)構(gòu)蛋白VP1的氨基酸序列比較保守，在SVV不同分離株中同源性比對95.8%至100%，但是與其他小RNA病毒的同源性比較遠(yuǎn)，所以VP1蛋白可以作為檢測對象以區(qū)分其他病原體（Gimenez-Lirolaetal2016）。1.2.2.3非結(jié)構(gòu)蛋白P2和P3P2和P3基因組區(qū)域主要編碼病毒非結(jié)構(gòu)蛋白，參與病毒蛋白質(zhì)的加工和病毒的復(fù)制（Segalesetal2016）。P2基因組可編碼三種非結(jié)構(gòu)蛋白2A、2B和2C。其中2A蛋白包含小RNA病毒科病毒的保守基序NPG/P模體作為結(jié)尾，但只

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文6圖1-3SVV感染的臨床癥狀（Lemeetal2017）Fig.1-3TheclinicalandpathologicoutcomesofSVVinfection1.5塞內(nèi)卡谷病毒感染豬的病理變化豬感染SVV后死亡，在進(jìn)行病亡剖檢時(shí)，發(fā)現(xiàn)腹瀉的仔豬中有很大一部分表現(xiàn)出皮下或腸系膜水腫，并且大多數(shù)仔豬的胃中存留大量母乳（Stevenetal2017）。小腸和大腸的內(nèi)容物具有流體稠度，腸粘膜沒有肉眼可見的病變（Segalesetal2017）。個(gè)別感染案例還可見漿液纖維素性腹膜炎、心包炎，局部廣泛性空腸炎和局灶性胃潰瘍（花群俊等2019；Alaisetal2017）。豬SVV感染后第3至7天，淋巴結(jié)、脾臟、扁桃體出現(xiàn)淋巴樣增生、肺臟膨脹不全，并伴有彌漫性充血（Joshietal2016）。1.6塞內(nèi)卡谷病毒的防控措施當(dāng)前還沒有塞內(nèi)卡病的有效疫苗，也沒有針對該病的有效治療手段。一些學(xué)者通過反向遺傳學(xué)構(gòu)建了克隆的KS15-01菌株的載體pKS15-01-克隆，為SVV疫苗的應(yīng)用開發(fā)提供了堅(jiān)實(shí)的物質(zhì)基礎(chǔ)（ZhenHCetal2016）。與此同時(shí)，中國學(xué)者首次通過BHK21細(xì)胞旋轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)了CH-FJZZ-2017病毒株，縮水甘油醛滅活劑滅活后，用油乳化佐劑乳化并以每只動物2g的劑量免疫，可以產(chǎn)生較高滴度的中和抗體（YangFetal2018）。依據(jù)當(dāng)前研究結(jié)論可以確定，SVV的危害性可防可控，它的危害性不比口蹄疫病毒造成的結(jié)局，基本上感染SVV的大豬，架子豬，成年母豬等恢復(fù)良好，不會引起嚴(yán)重的公共衛(wèi)生后果和經(jīng)濟(jì)損失，但

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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