穗醋栗是茶藨子科（Saxifrgaceae）茶藨子屬（Ribes L.）小漿果類植物,按照農(nóng)藝性狀分為黑穗醋栗、紅穗醋栗和白穗醋栗,果實顏色分別為紫黑色、紅色和白色,營養(yǎng)成份豐富,而且黑穗醋栗和紅穗醋栗果實中富含花色苷�；ㄉ帐且环N天然水溶性類黃酮物質(zhì),這種物質(zhì)對人身體機能的調(diào)節(jié)以及營養(yǎng)物質(zhì)的吸收有一定的作用,特別在預(yù)防一些神經(jīng)疾病和心腦血管疾病方面有突出功效。結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控基因是影響花青素生物合成的兩個主要類別。迄今為止,激活花青素途徑中結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄的由R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子、bHLH類轉(zhuǎn)錄因子和WD40蛋白組成的MYB-bHLH-WD40（MBW）轉(zhuǎn)錄復(fù)合體被廣泛研究。最近的許多研究表明花青素生物合成受到轉(zhuǎn)錄,轉(zhuǎn)錄后和翻譯后機制的控制,MBW復(fù)合物中的R2R3-MYB蛋白通常在花青素生物合成和積累中起關(guān)鍵作用。為探究不同穗醋栗品種花色苷生物合成的分子機理,本研究以黑穗醋栗、紅穗醋栗和白穗醋栗的栽培種為試驗材料,應(yīng)用RACE方法克隆了與穗醋栗花色苷合成相關(guān)的MYB1基因全長序列,并對穗醋栗MYB1基因進(jìn)行基因特征及系統(tǒng)進(jìn)化分析。利用實時定量PCR分析穗醋栗果實5個不同生長發(fā)育時期M... 

【文章來源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２花色苷的生物合成途徑［Ｉ４］??１．３花色苷合成途徑中關(guān)鍵結(jié)構(gòu)基因??

?２穗醋栗ＭＹＢ１轉(zhuǎn)錄因子的克隆???２穗醋栗ＭＹＢ１轉(zhuǎn)錄因子的克隆??２．１試驗材料??以采摘自東北農(nóng)業(yè)大學(xué)的５個生長發(fā)育時期的黑穗醋栗、紅穗醋栗和白穗醋栗果實??為試驗材料，分別采摘于２０１７年５月上旬至７月末，液氮速凍，置于－８０?°Ｃ保存使用。??Ｋ鐵＾：奪??動＾爾’?’?：趙—??＜５．０?＇０％；?５．卜７．０?１．２５％）?７．卜．９．０?１．５０％；?９．１－１１．０?（?７５％；?＞１１．１?？?１００°〇）??圖２－１不同生長發(fā)育階段的穗醋栗果實（果徑／ｍｍ），Ｂａｒ＝５ｍｍ。??注：從上至下為黑素醋栗、紅穗醋栗和白穗醋栗，穗醋栗果實轉(zhuǎn)色程度括號中的數(shù)字己標(biāo)出??２．２試驗試劑??２．２．１?ＲＮＡ提取試劑??植物通用總ＲＮＡ提取試劑盒購自于北京Ｂｉｏｔｅｋｅ生物技術(shù)有限公司；７５％乙醇購??自于哈爾濱賽拓生物技術(shù)有限公司；ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅｄｄＨ：０；?ｌＯｘＭＯＰＳ緩沖液；ＲＮＡ上樣??緩沖液。??２．２．２?ＲＡＣＥ法克隆所用試劑??反轉(zhuǎn)錄試劑盒?Ｆｉｒｓｔ?Ｓｔｒａｎｄ?ｃＤＮＡ?Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｋｉｔ、；？￡＞ｉ５Ｔ－Ｔ５?Ｃｌｏｎｉｎｇ?Ｋｉｔ??載體試劑盒、Ｔｒａｎｓ７ｉ／（７１Ｍ?ＨｉＦｉ?ＤＮＡ?Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ、卡納霉素（Ｋａｎａ?）、Ｍａｒｋｅｒ??（ＤＬ２０００?）均購自北京全式金（ＴｒａｎｓＧｅｎ?）；?Ｈｉｇｈ?Ｐｕｒｅ?ＰＣＲ?Ｐｒｏｄｕｃｔ?Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ｋｉｔ??（ｃＤＮＡ?產(chǎn)物純化試劑盒）購自?Ｒｏｃｈｅ?公司；Ｔｅｒｍｉｎａｌ?Ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｔｉｄｙｌ?Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ??（ＴｄＴ）?５＇末端加尾反

件進(jìn)行。??將ＰＣＲ產(chǎn)物用０．８％的瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳分離，恒定電壓１２０Ｖ，凝膠由全自動??凝膠成像系統(tǒng)成像。??（３）在無菌超凈臺中進(jìn)行菌種保存，�。担埃�?ｐＬ加入５００?ｐＬ４０％甘油用移液器吸打??混勻，液氮速凍，置于－８０?°Ｃ冰箱保存?zhèn)溆谩??（４）�。担埃�?ｐＬ菌液送與擎科嘉美生物科技有限公司測序。??２．４結(jié)果與分析??２．４．１穗醋栗果實總ＲＮＡ提取結(jié)果??利用植物提�。遥危猎噭┖幸圆杉模撤N果實轉(zhuǎn)色程度為１００％的穗醋栗果實為樣??品，進(jìn)行總ＲＮＡ提齲結(jié)果如圖２－２所示，三條ＲＮＡ條帶依次為２８ＳｒＲＮＡ，１８Ｓ??ｒＲＮＡ，５ＳｒＲＮＡ�？偅遥危撂崛〗Y(jié)果較好，未出現(xiàn)ＲＮＡ降解等情況。對總ＲＮＡ溶液進(jìn)??行測量，其濃度為〇．３６）＿ｉｇ４ｉＬ，Ａ２６Ｑ／Ａ＾＝２．０２，符合條件，可以進(jìn)一步進(jìn)行試驗。??Ｌｌ，ｔｅＴ＂５ｓ??圖２－２穗醋栗ＲＮＡ提取??－１３－??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]百合花青素合成調(diào)控的研究進(jìn)展[J]. 肖偉,張銘芳,張秀海,王倩,董然.  北方園藝. 2018(20)
[2]植物花青素合成途徑中的調(diào)控基因研究進(jìn)展[J]. 宮硤,薛靜,張曉東.  生物技術(shù)進(jìn)展. 2011(06)

碩士論文
[1]漢源黑櫻桃MYB10基因的克隆、表達(dá)及功能驗證[D]. 關(guān)雎.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]茄子花青素生物合成關(guān)鍵MYB轉(zhuǎn)錄因子的篩選及克隆[D]. 王世界.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[3]紅穗醋栗種植資源研究與評價[D]. 喬曉穎.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011



本文編號：3594836