木姜子FATB基因的克隆和功能分析
發(fā)布時(shí)間:2022-01-16 04:05
中短鏈脂肪酸(Medium-chain fatty acids,MCFAs)包括辛酸(8:0)、癸酸(10:0)、月桂酸(12:0)、肉豆蔻酸(14:0),是工業(yè)生產(chǎn)洗滌劑、肥皂、化妝品、表面活性劑和潤滑劑重要原料。目前中短鏈脂肪酸的生產(chǎn)不能滿足我們?nèi)找嬖鲩L(zhǎng)的需求。通過基因工程手段把其他植物尤其是萼距花屬植物中調(diào)控中短鏈脂肪酸的關(guān)鍵酶轉(zhuǎn)化到作物中在國外已經(jīng)取得了一定的成果,然而在我國這些研究還處于起步階段。我國許多樟科植物種子中都含有中短鏈脂肪酸,具有豐富的遺傳資源。在我國樟科植物木姜子種仁中,富含約50%的月桂酸和20%的癸酸,是發(fā)掘提高中短鏈脂肪酸關(guān)鍵酶很好的材料。在脂肪酸從頭合成過程中,FATB酰基-ACP硫酯酶FATB是控制脂肪酸碳鏈長(zhǎng)短的關(guān)鍵酶。通過同源克隆的方法,我們從木姜子種仁中克隆得到了FATB。通過構(gòu)建木姜子的FATB基因表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化擬南芥植株中,在擬南芥轉(zhuǎn)化株系中對(duì)上述克隆的基因進(jìn)行功能分析。為進(jìn)一步探討木姜子種子中月桂酸積累的機(jī)理,我們對(duì)發(fā)育中后期種胚的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行了分析。本研究獲得如下主要結(jié)果:1)從木姜子中克隆得到了一個(gè)FATB基因,基因的全長(zhǎng)為1257bp。...
【文章來源】:西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:54 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
1.文獻(xiàn)綜述
1.1 中短鏈脂肪酸用途
1.2 植物特殊脂肪酸與木姜子
1.3 植物脂肪酸合成與和裝配
1.3.1 植物脂肪酸合成
1.3.2 植物脂肪酸的裝配
1.4 ;-ACP硫酯酶基因的研究進(jìn)展
1.4.1 ;-ACP硫酯酶基因的分類和功能研究
1.4.2 酰基-ACP硫酯酶蛋白結(jié)構(gòu)的研究
1.4.3 FATB研究進(jìn)展
1.5 植物脂肪酸基因工程的研究進(jìn)展
1.6 本研究的目的以及意義
2.材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)所需材料
2.2 擬南芥種子脂肪酸組分分析
2.3 木姜子種子脂肪酸成分分析
2.4 總RNA提取與c DNA單鏈合成
2.5 異源表達(dá)FATB植物表達(dá)載體的構(gòu)建及擬南芥轉(zhuǎn)基因植株的獲得
2.5.1 同源克隆引物設(shè)計(jì)與基因的克隆
2.5.2 表達(dá)載體的改造
2.5.3 構(gòu)建LpFATB表達(dá)載體
2.6 擬南芥轉(zhuǎn)基因植株的獲得
2.7 RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析
3.結(jié)果與分析
3.1 木姜子種仁不同發(fā)育階段的脂肪酸分析
3.2 木姜子LpFATB基因的全長(zhǎng)克隆及相應(yīng)的生物信息學(xué)分析
3.2.1 木姜子LpFATB基因的全長(zhǎng)克隆
3.2.2 木姜子LpFATB的初步生物信息學(xué)分析
3.3 木姜子LpFATB基因轉(zhuǎn)化擬南芥T3代株系脂肪酸組分的分析
3.4 木姜子種仁轉(zhuǎn)錄組分析
3.5 改造FATB N端沒能在擬南芥中得到月桂酸
4.討論
4.1 木姜子LpFATB基因的功能分析
4.2 木姜子FATB不能產(chǎn)生中短鏈脂肪酸的原因分析
4.3 木姜子LpFATB基因的氨基酸位點(diǎn)與功能分析
5.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]種子特異表達(dá)二酰甘油;D(zhuǎn)移酶基因(VgDGAT1)提高亞麻薺種子油脂積累[J]. 苑麗霞,毛雪,高昌勇,張莉,薛金愛,楊致榮,李潤植. 植物生理學(xué)報(bào). 2015(05)
[2]中國種子植物物種多樣性及其分布格局[J]. 應(yīng)俊生. 生物多樣性. 2001(04)
[3]木姜子屬三種植物油的脂肪酸成分[J]. 王靜平,孟紹江,李京民. Journal of Integrative Plant Biology. 1983(03)
[4]八種富含月桂酸、癸酸的樟科種子油[J]. 王靜平,孟紹江,李京民. 油脂科技. 1982(03)
[5]西藏六種植物種子油的成份分析[J]. 張慶華,盂紹江,王靜萍,何關(guān)福. Journal of Integrative Plant Biology. 1979(01)
本文編號(hào):3591899
【文章來源】:西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:54 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
1.文獻(xiàn)綜述
1.1 中短鏈脂肪酸用途
1.2 植物特殊脂肪酸與木姜子
1.3 植物脂肪酸合成與和裝配
1.3.1 植物脂肪酸合成
1.3.2 植物脂肪酸的裝配
1.4 ;-ACP硫酯酶基因的研究進(jìn)展
1.4.1 ;-ACP硫酯酶基因的分類和功能研究
1.4.2 酰基-ACP硫酯酶蛋白結(jié)構(gòu)的研究
1.4.3 FATB研究進(jìn)展
1.5 植物脂肪酸基因工程的研究進(jìn)展
1.6 本研究的目的以及意義
2.材料與方法
2.1 實(shí)驗(yàn)所需材料
2.2 擬南芥種子脂肪酸組分分析
2.3 木姜子種子脂肪酸成分分析
2.4 總RNA提取與c DNA單鏈合成
2.5 異源表達(dá)FATB植物表達(dá)載體的構(gòu)建及擬南芥轉(zhuǎn)基因植株的獲得
2.5.1 同源克隆引物設(shè)計(jì)與基因的克隆
2.5.2 表達(dá)載體的改造
2.5.3 構(gòu)建LpFATB表達(dá)載體
2.6 擬南芥轉(zhuǎn)基因植株的獲得
2.7 RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析
3.結(jié)果與分析
3.1 木姜子種仁不同發(fā)育階段的脂肪酸分析
3.2 木姜子LpFATB基因的全長(zhǎng)克隆及相應(yīng)的生物信息學(xué)分析
3.2.1 木姜子LpFATB基因的全長(zhǎng)克隆
3.2.2 木姜子LpFATB的初步生物信息學(xué)分析
3.3 木姜子LpFATB基因轉(zhuǎn)化擬南芥T3代株系脂肪酸組分的分析
3.4 木姜子種仁轉(zhuǎn)錄組分析
3.5 改造FATB N端沒能在擬南芥中得到月桂酸
4.討論
4.1 木姜子LpFATB基因的功能分析
4.2 木姜子FATB不能產(chǎn)生中短鏈脂肪酸的原因分析
4.3 木姜子LpFATB基因的氨基酸位點(diǎn)與功能分析
5.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]種子特異表達(dá)二酰甘油;D(zhuǎn)移酶基因(VgDGAT1)提高亞麻薺種子油脂積累[J]. 苑麗霞,毛雪,高昌勇,張莉,薛金愛,楊致榮,李潤植. 植物生理學(xué)報(bào). 2015(05)
[2]中國種子植物物種多樣性及其分布格局[J]. 應(yīng)俊生. 生物多樣性. 2001(04)
[3]木姜子屬三種植物油的脂肪酸成分[J]. 王靜平,孟紹江,李京民. Journal of Integrative Plant Biology. 1983(03)
[4]八種富含月桂酸、癸酸的樟科種子油[J]. 王靜平,孟紹江,李京民. 油脂科技. 1982(03)
[5]西藏六種植物種子油的成份分析[J]. 張慶華,盂紹江,王靜萍,何關(guān)福. Journal of Integrative Plant Biology. 1979(01)
本文編號(hào):3591899
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