犬腎細胞（Madin Darby Canine Kidney,MDCK）作為流感病毒類疫苗生產(chǎn)最常用的細胞系之一。前人研究發(fā)現(xiàn),貼壁MDCK細胞作為連續(xù)細胞系在長期傳代過程中會出現(xiàn)細胞形態(tài)、生長能力改變,流感病毒生產(chǎn)能力下降等不穩(wěn)定問題。但更具應(yīng)用價值的無血清懸浮MDCK細胞經(jīng)長期傳代后,其生產(chǎn)流感病毒過程的穩(wěn)定性特征尚不明確。因此,有必要對長期傳代培養(yǎng)過程中的懸浮MDCK細胞形態(tài)、生長能力以及生產(chǎn)流感病毒過程的穩(wěn)定性進行研究。本文以懸浮MDCK細胞生產(chǎn)H9N2禽流感病毒過程為研究對象。首先,對實驗室已有的懸浮MDCK細胞進行長達200天以上傳代培養(yǎng),獲得P1、P29、P63、P88、P111多個代次懸浮MDCK細胞。在考察各代次細胞形態(tài)以及生長穩(wěn)定性中,發(fā)現(xiàn)各代次細胞形態(tài)相似且良好,無明顯結(jié)團現(xiàn)象;在傳代培養(yǎng)以及批培養(yǎng)過程中5個代次細胞比生長速率、細胞直徑、細胞活率之間無顯著性差異,生長能力維持穩(wěn)定。在病毒生產(chǎn)穩(wěn)定性的考察中,以P1、P29、P88、P111共4個代次懸浮MDCK細胞為研究對象,實驗結(jié)果表明,血凝效價（HA滴度）與單細胞產(chǎn)毒率（Svy）均隨著細胞代次的增加而增加,其中... 

【文章來源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１研究思路框圖??Ｆｉｇ．?３．１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｅａｒｃｈ?ｂｌｏｃｋ?ｄｉａｇｒａｍ??３．３實驗方案??首先使用實驗室自主研發(fā)無血清培養(yǎng)基對懸浮ＭＤＣＫ細胞進行長期傳代培養(yǎng)，獲??

第２２頁?華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文??圖３．２�？梢姡陂L達２００天的傳代過程中本實驗所用懸�。停模茫思毎螒B(tài)保持穩(wěn)定。??議圓麵??圖３．２不同代次懸�。停模茫思毎螒B(tài)??Ｆｉｇ．?３．２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ?ＭＤＣＫ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｐａｓｓａｇｅｓ??３．４．１．２細胞代次對傳代培養(yǎng)中生長特性的影響??為研究懸�。停模茫思毎L期傳代過程中細胞生長的穩(wěn)定性，本研宄以Ｐｌ、Ｐ２９、??Ｐ６３、Ｐ８８、Ｐ１１１５個代次細胞為研究對象。??｜?１２＾??１８－ｒ＾???＾?ＰＩ?－ｍ－?Ｐ２９?－ａ－?Ｐ６３?，??｜｜＿?１??？—?０１?ｉ?ｕ?ｉｉ?ｉｉｉ?〇?？?？?＾?？?ｉ?？?ｉ??＞?０?２?４?６?８?１０?１２?１４?１６?０?２?４?６?８?１０?１２?１４?１６??Ｔｉｍｅ（ｄ）?Ｔｉｍｅ（ｄ）??Ｃ??１．４－１???１．２－??ｉ．〇－??ｐｉ??＾?０．８－??３?Ｐ２９??１１?〇，６＂?＋?Ｐ６３??〇?４－??＋?Ｐ８８??〇?２－??Ｗ？乂?Ｐｉｌｌ??（）？〇?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??０?２?４?６?８?１０?１２?１４?１６??Ｔｉｍｅ（ｄ）??圖３．３不同代次ＭＤＣＫ細胞傳代過程中細胞生長情況（Ａ）、細胞直徑（Ｂ）與比生長速率的變化（Ｃ）??Ｆｉｇ．?３．３?ＭＤＣＫ?ｃｅｌｌ?ｇｒｏｗｔｈ?（Ａ），?ｄｉａｍｅｔｅｒ?（Ｂ）?ａｎｄ?ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｇｒｏｗｔｈ?ｒａｔｅ?（Ｃ）?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｐａｓｓａｇｅｓ?ｄｕｒｉｎｇ??ｌｏｎｇ?ｔｉｍｅ?ｃｕｌｔ

第２２頁?華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文??圖３．２。可見，在長達２００天的傳代過程中本實驗所用懸浮ＭＤＣＫ細胞形態(tài)保持穩(wěn)定。??議圓麵??圖３．２不同代次懸�。停模茫思毎螒B(tài)??Ｆｉｇ．?３．２?Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ?ｏｆ?ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ?ＭＤＣＫ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｐａｓｓａｇｅｓ??３．４．１．２細胞代次對傳代培養(yǎng)中生長特性的影響??為研究懸浮ＭＤＣＫ細胞長期傳代過程中細胞生長的穩(wěn)定性，本研宄以Ｐｌ、Ｐ２９、??Ｐ６３、Ｐ８８、Ｐ１１１５個代次細胞為研究對象。??｜?１２＾??１８－ｒ＾???＾?ＰＩ?－ｍ－?Ｐ２９?－ａ－?Ｐ６３?，??｜｜＿?１??？—?０１?ｉ?ｕ?ｉｉ?ｉｉｉ?〇?？?？?＾?？?ｉ?？?ｉ??＞?０?２?４?６?８?１０?１２?１４?１６?０?２?４?６?８?１０?１２?１４?１６??Ｔｉｍｅ（ｄ）?Ｔｉｍｅ（ｄ）??Ｃ??１．４－１???１．２－??ｉ．〇－??ｐｉ??＾?０．８－??３?Ｐ２９??１１?〇，６＂?＋?Ｐ６３??〇?４－??＋?Ｐ８８??〇?２－??Ｗ？乂?Ｐｉｌｌ??（）？〇?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ??０?２?４?６?８?１０?１２?１４?１６??Ｔｉｍｅ（ｄ）??圖３．３不同代次ＭＤＣＫ細胞傳代過程中細胞生長情況（Ａ）、細胞直徑（Ｂ）與比生長速率的變化（Ｃ）??Ｆｉｇ．?３．３?ＭＤＣＫ?ｃｅｌｌ?ｇｒｏｗｔｈ?（Ａ），?ｄｉａｍｅｔｅｒ?（Ｂ）?ａｎｄ?ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｇｒｏｗｔｈ?ｒａｔｅ?（Ｃ）?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｐａｓｓａｇｅｓ?ｄｕｒｉｎｇ??ｌｏｎｇ?ｔｉｍｅ?ｃｕｌｔ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]埃博拉疫苗研究進展[J]. 潘衛(wèi)兵,劉瑩.  醫(yī)學(xué)信息. 2020(01)
[2]MDCK懸浮細胞制備及流感病毒敏感性研究[J]. 李自良,王家敏,趙彩紅,王美皓,李莉,張雪梅,李倬,靳冬武,馬忠仁,喬自林.  中國人獸共患病學(xué)報. 2019(11)
[3]懸浮MDCK細胞培養(yǎng)H7N9流感病毒時TPCK胰酶添加量的優(yōu)化研究[J]. 孟子延,張家友,劉琛,張哲罡,邱冉,羅丹,施金榮,趙巍,夏志武,楊曉明.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2019 (11)
[4]基于細胞培養(yǎng)的流感疫苗研究進展[J]. 羅劍,李秀玲.  中國新藥雜志. 2019(21)
[5]哺乳動物細胞生產(chǎn)人用滅活疫苗相關(guān)技術(shù)進展[J]. 白仲虎,李昕然,王榮斌,劉學(xué)榮,安芳蘭,張云德,劉秀霞,劉春立,楊艷坤.  中國細胞生物學(xué)學(xué)報. 2019(10)
[6]細胞基質(zhì)流感疫苗的研究[J]. 劉婷,趙慧,李長貴.  微生物學(xué)免疫學(xué)進展. 2019(04)
[7]犬細小病毒通過促進ROS產(chǎn)生/線粒體損傷誘導(dǎo)宿主細胞的凋亡[J]. 王巖,張建樓,趙軼男,王曉敏,王猛,李笑然,仲飛.  河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2019(03)
[8]利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建穩(wěn)定表達人白蛋白基因的中國倉鼠卵巢細胞系[J]. 周松濤,陳蘊,龔笑海,金堅,李華鐘.  中國生物工程雜志. 2019(04)
[9]流感疫苗的研究進展[J]. 嚴(yán)延生.  中國人獸共患病學(xué)報. 2018(08)
[10]傳代次數(shù)對人膠質(zhì)瘤U87細胞系生物學(xué)特性的影響[J]. 王濟舟,曾宇,宋燁,漆松濤.  分子影像學(xué)雜志. 2017(02)

博士論文
[1]基于MDCK細胞高密度培養(yǎng)的甲型流感病毒疫苗生產(chǎn)工藝開發(fā)與優(yōu)化[D]. 黃錠.華東理工大學(xué) 2016
[2]草氨酸鈉抑制乳酸脫氫酶對鼻咽癌生長及放射敏感性的影響[D]. 翟小明.蘇州大學(xué) 2014

碩士論文
[1]H9N2亞型禽流感病毒感染鵪鶉肺的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 馮賀龍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]基于MDCK細胞懸浮培養(yǎng)擴增H9N2流感病毒的維持培養(yǎng)基開發(fā)及應(yīng)用[D]. 謝盼.華東理工大學(xué) 2019
[3]HD11細胞感染H9N2 AIV與LPS刺激后mRNA表達譜及炎癥信號通路的變化[D]. 薛甜霞.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[4]豬瘟病毒感染細胞的代謝組學(xué)及葡萄糖促進豬瘟病毒增殖的研究[D]. 張必凱.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2017
[5]無血清懸浮培養(yǎng)MDCK細胞生產(chǎn)H9亞型禽流感疫苗的關(guān)鍵控制點探究[D]. 彭雯娟.華東理工大學(xué) 2017



本文編號：3586959