長期傳代培養(yǎng)中懸浮MDCK細(xì)胞生長與流感病毒生產(chǎn)穩(wěn)定性
發(fā)布時(shí)間:2022-01-13 18:49
犬腎細(xì)胞(Madin Darby Canine Kidney,MDCK)作為流感病毒類疫苗生產(chǎn)最常用的細(xì)胞系之一。前人研究發(fā)現(xiàn),貼壁MDCK細(xì)胞作為連續(xù)細(xì)胞系在長期傳代過程中會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)、生長能力改變,流感病毒生產(chǎn)能力下降等不穩(wěn)定問題。但更具應(yīng)用價(jià)值的無血清懸浮MDCK細(xì)胞經(jīng)長期傳代后,其生產(chǎn)流感病毒過程的穩(wěn)定性特征尚不明確。因此,有必要對(duì)長期傳代培養(yǎng)過程中的懸浮MDCK細(xì)胞形態(tài)、生長能力以及生產(chǎn)流感病毒過程的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。本文以懸浮MDCK細(xì)胞生產(chǎn)H9N2禽流感病毒過程為研究對(duì)象。首先,對(duì)實(shí)驗(yàn)室已有的懸浮MDCK細(xì)胞進(jìn)行長達(dá)200天以上傳代培養(yǎng),獲得P1、P29、P63、P88、P111多個(gè)代次懸浮MDCK細(xì)胞。在考察各代次細(xì)胞形態(tài)以及生長穩(wěn)定性中,發(fā)現(xiàn)各代次細(xì)胞形態(tài)相似且良好,無明顯結(jié)團(tuán)現(xiàn)象;在傳代培養(yǎng)以及批培養(yǎng)過程中5個(gè)代次細(xì)胞比生長速率、細(xì)胞直徑、細(xì)胞活率之間無顯著性差異,生長能力維持穩(wěn)定。在病毒生產(chǎn)穩(wěn)定性的考察中,以P1、P29、P88、P111共4個(gè)代次懸浮MDCK細(xì)胞為研究對(duì)象,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,血凝效價(jià)(HA滴度)與單細(xì)胞產(chǎn)毒率(Svy)均隨著細(xì)胞代次的增加而增加,其中...
【文章來源】:華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:83 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖3.1研究思路框圖??Fig.?3.1?The?research?block?diagram??3.3實(shí)驗(yàn)方案??首先使用實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)無血清培養(yǎng)基對(duì)懸。停模茫思(xì)胞進(jìn)行長期傳代培養(yǎng),獲??
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【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]埃博拉疫苗研究進(jìn)展[J]. 潘衛(wèi)兵,劉瑩. 醫(yī)學(xué)信息. 2020(01)
[2]MDCK懸浮細(xì)胞制備及流感病毒敏感性研究[J]. 李自良,王家敏,趙彩紅,王美皓,李莉,張雪梅,李倬,靳冬武,馬忠仁,喬自林. 中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2019(11)
[3]懸浮MDCK細(xì)胞培養(yǎng)H7N9流感病毒時(shí)TPCK胰酶添加量的優(yōu)化研究[J]. 孟子延,張家友,劉琛,張哲罡,邱冉,羅丹,施金榮,趙巍,夏志武,楊曉明. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2019 (11)
[4]基于細(xì)胞培養(yǎng)的流感疫苗研究進(jìn)展[J]. 羅劍,李秀玲. 中國新藥雜志. 2019(21)
[5]哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)人用滅活疫苗相關(guān)技術(shù)進(jìn)展[J]. 白仲虎,李昕然,王榮斌,劉學(xué)榮,安芳蘭,張?jiān)频?劉秀霞,劉春立,楊艷坤. 中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2019(10)
[6]細(xì)胞基質(zhì)流感疫苗的研究[J]. 劉婷,趙慧,李長貴. 微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2019(04)
[7]犬細(xì)小病毒通過促進(jìn)ROS產(chǎn)生/線粒體損傷誘導(dǎo)宿主細(xì)胞的凋亡[J]. 王巖,張建樓,趙軼男,王曉敏,王猛,李笑然,仲飛. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(03)
[8]利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)人白蛋白基因的中國倉鼠卵巢細(xì)胞系[J]. 周松濤,陳蘊(yùn),龔笑海,金堅(jiān),李華鐘. 中國生物工程雜志. 2019(04)
[9]流感疫苗的研究進(jìn)展[J]. 嚴(yán)延生. 中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2018(08)
[10]傳代次數(shù)對(duì)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞系生物學(xué)特性的影響[J]. 王濟(jì)舟,曾宇,宋燁,漆松濤. 分子影像學(xué)雜志. 2017(02)
博士論文
[1]基于MDCK細(xì)胞高密度培養(yǎng)的甲型流感病毒疫苗生產(chǎn)工藝開發(fā)與優(yōu)化[D]. 黃錠.華東理工大學(xué) 2016
[2]草氨酸鈉抑制乳酸脫氫酶對(duì)鼻咽癌生長及放射敏感性的影響[D]. 翟小明.蘇州大學(xué) 2014
碩士論文
[1]H9N2亞型禽流感病毒感染鵪鶉肺的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 馮賀龍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]基于MDCK細(xì)胞懸浮培養(yǎng)擴(kuò)增H9N2流感病毒的維持培養(yǎng)基開發(fā)及應(yīng)用[D]. 謝盼.華東理工大學(xué) 2019
[3]HD11細(xì)胞感染H9N2 AIV與LPS刺激后mRNA表達(dá)譜及炎癥信號(hào)通路的變化[D]. 薛甜霞.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[4]豬瘟病毒感染細(xì)胞的代謝組學(xué)及葡萄糖促進(jìn)豬瘟病毒增殖的研究[D]. 張必凱.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2017
[5]無血清懸浮培養(yǎng)MDCK細(xì)胞生產(chǎn)H9亞型禽流感疫苗的關(guān)鍵控制點(diǎn)探究[D]. 彭雯娟.華東理工大學(xué) 2017
本文編號(hào):3586959
【文章來源】:華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】:83 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
圖3.1研究思路框圖??Fig.?3.1?The?research?block?diagram??3.3實(shí)驗(yàn)方案??首先使用實(shí)驗(yàn)室自主研發(fā)無血清培養(yǎng)基對(duì)懸。停模茫思(xì)胞進(jìn)行長期傳代培養(yǎng),獲??
第22頁?華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文??圖3.2?梢,在長達(dá)200天的傳代過程中本實(shí)驗(yàn)所用懸。停模茫思(xì)胞形態(tài)保持穩(wěn)定。??議圓麵??圖3.2不同代次懸。停模茫思(xì)胞形態(tài)??Fig.?3.2?Morphology?of?suspended?MDCK?cells?in?different?passages??3.4.1.2細(xì)胞代次對(duì)傳代培養(yǎng)中生長特性的影響??為研究懸。停模茫思(xì)胞長期傳代過程中細(xì)胞生長的穩(wěn)定性,本研宄以Pl、P29、??P63、P88、P1115個(gè)代次細(xì)胞為研究對(duì)象。??|?12^??18-r^???^?PI?-m-?P29?-a-?P63?,??||_?1???—?01?i?u?ii?iii?〇?????^???i???i??>?0?2?4?6?8?10?12?14?16?0?2?4?6?8?10?12?14?16??Time(d)?Time(d)??C??1.4-1???1.2-??i.〇-??pi??^?0.8-??3?P29??11?〇,6"?+?P63??〇?4-??+?P88??〇?2-??W?乂?Pill??()?〇?I?i?i?i?i?i?i?i??0?2?4?6?8?10?12?14?16??Time(d)??圖3.3不同代次MDCK細(xì)胞傳代過程中細(xì)胞生長情況(A)、細(xì)胞直徑(B)與比生長速率的變化(C)??Fig.?3.3?MDCK?cell?growth?(A),?diameter?(B)?and?specific?growth?rate?(C)?of?different?passages?during??long?time?cult
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【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]埃博拉疫苗研究進(jìn)展[J]. 潘衛(wèi)兵,劉瑩. 醫(yī)學(xué)信息. 2020(01)
[2]MDCK懸浮細(xì)胞制備及流感病毒敏感性研究[J]. 李自良,王家敏,趙彩紅,王美皓,李莉,張雪梅,李倬,靳冬武,馬忠仁,喬自林. 中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2019(11)
[3]懸浮MDCK細(xì)胞培養(yǎng)H7N9流感病毒時(shí)TPCK胰酶添加量的優(yōu)化研究[J]. 孟子延,張家友,劉琛,張哲罡,邱冉,羅丹,施金榮,趙巍,夏志武,楊曉明. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2019 (11)
[4]基于細(xì)胞培養(yǎng)的流感疫苗研究進(jìn)展[J]. 羅劍,李秀玲. 中國新藥雜志. 2019(21)
[5]哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)人用滅活疫苗相關(guān)技術(shù)進(jìn)展[J]. 白仲虎,李昕然,王榮斌,劉學(xué)榮,安芳蘭,張?jiān)频?劉秀霞,劉春立,楊艷坤. 中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2019(10)
[6]細(xì)胞基質(zhì)流感疫苗的研究[J]. 劉婷,趙慧,李長貴. 微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2019(04)
[7]犬細(xì)小病毒通過促進(jìn)ROS產(chǎn)生/線粒體損傷誘導(dǎo)宿主細(xì)胞的凋亡[J]. 王巖,張建樓,趙軼男,王曉敏,王猛,李笑然,仲飛. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(03)
[8]利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)人白蛋白基因的中國倉鼠卵巢細(xì)胞系[J]. 周松濤,陳蘊(yùn),龔笑海,金堅(jiān),李華鐘. 中國生物工程雜志. 2019(04)
[9]流感疫苗的研究進(jìn)展[J]. 嚴(yán)延生. 中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2018(08)
[10]傳代次數(shù)對(duì)人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞系生物學(xué)特性的影響[J]. 王濟(jì)舟,曾宇,宋燁,漆松濤. 分子影像學(xué)雜志. 2017(02)
博士論文
[1]基于MDCK細(xì)胞高密度培養(yǎng)的甲型流感病毒疫苗生產(chǎn)工藝開發(fā)與優(yōu)化[D]. 黃錠.華東理工大學(xué) 2016
[2]草氨酸鈉抑制乳酸脫氫酶對(duì)鼻咽癌生長及放射敏感性的影響[D]. 翟小明.蘇州大學(xué) 2014
碩士論文
[1]H9N2亞型禽流感病毒感染鵪鶉肺的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D]. 馮賀龍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]基于MDCK細(xì)胞懸浮培養(yǎng)擴(kuò)增H9N2流感病毒的維持培養(yǎng)基開發(fā)及應(yīng)用[D]. 謝盼.華東理工大學(xué) 2019
[3]HD11細(xì)胞感染H9N2 AIV與LPS刺激后mRNA表達(dá)譜及炎癥信號(hào)通路的變化[D]. 薛甜霞.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[4]豬瘟病毒感染細(xì)胞的代謝組學(xué)及葡萄糖促進(jìn)豬瘟病毒增殖的研究[D]. 張必凱.中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2017
[5]無血清懸浮培養(yǎng)MDCK細(xì)胞生產(chǎn)H9亞型禽流感疫苗的關(guān)鍵控制點(diǎn)探究[D]. 彭雯娟.華東理工大學(xué) 2017
本文編號(hào):3586959
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