為初步探究黃曲霉McrA的生物學功能,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR）克隆黃曲霉轉(zhuǎn)錄因子Af McrA基因,并對其編碼蛋白的理化性質(zhì)、保守結(jié)構(gòu)域、亞細胞定位、二級結(jié)構(gòu)等進行預測。實時熒光定量聚合酶鏈式反應（quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR）對不同培養(yǎng)時間Af McrA的表達情況進行分析。結(jié)果表明,Af McrA基因全長1 448 bp,由3個內(nèi)含子和4個外顯子組成。c DNA為1 101 bp,編碼366個氨基酸。生物信息學預測,Af McrA是一個分子質(zhì)量為39.82 k Da,理論等電點為8.97,不穩(wěn)定的親水蛋白,且不含信號肽和跨膜結(jié)構(gòu)域; Af McrA具有一個高度保守的Zn（Ⅱ）2Cys6鋅指結(jié)構(gòu)域,屬于C6轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)因子; Predict NLS預測Af McrA亞細胞定位于細胞核中; Af McrA二級結(jié)構(gòu)主要由無規(guī)則卷曲組成,延伸鏈、α-螺旋和β-轉(zhuǎn)角含量較低。qRT-... 

【文章來源】：食品與發(fā)酵工業(yè). 2020,46(20)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

黃曲霉RNA和Af McrA的c DNA序列擴增

以黃曲霉g DNA為模板，Mcr AF和Mcr AR為特異引物，PCR擴增出1條1 200～2 000 bp的條帶(圖2)。克隆測序獲得Af Mcr A的g DNA序列為1 448 bp。采用DNA-MAN軟件對Af Mcr A的c DNA和g DNA序列進行比對，發(fā)現(xiàn)Af Mcr A由3個內(nèi)含子和4個外顯子組成，且內(nèi)含子的剪切位點均符合真核生物的5"-GT和3"-AG原則(圖3)。2.3 Af McrA編碼蛋白的生物信息學分析

Af Mcr A共編碼366個氨基酸(圖3)。生物信息學預測，Af McrA是1個分子質(zhì)量為39.82 kDa，理論等電點為8.97，不穩(wěn)定的親水蛋白質(zhì)，且不含信號肽和跨膜結(jié)構(gòu)域。SMART預測，Af McrA包含1個GAL4鋅指蛋白結(jié)構(gòu)域(氨基酸殘基位點117～165)，且氨基酸序列Cys-X2-Cys-X6-Cys-X10-Cys-X2-Cys-X6-Cys(圖3)符合Zn(Ⅱ)2Cys6型轉(zhuǎn)錄因子典型的保守基因序列特征，其中6個半胱氨酸殘基共結(jié)合2個Zn2+。


本文編號：3560515