對中間蒼白桿菌SCUEC4菌株中與尼古丁降解相關(guān)的ocnC基因進(jìn)行克隆和表達(dá),并對OcnC蛋白的表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化,通過PCR擴(kuò)增獲得ocnC基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a（+）-ocnC,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）菌株進(jìn)行異源表達(dá),采用不同的IPTG濃度、誘導(dǎo)溫度和誘導(dǎo)時間對OcnC蛋白進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá).結(jié)果表明:ocnC基因大小為1344 bp,編碼蛋白分子量為48.0 kDa,重組表達(dá)菌株在IPTG濃度為1.0 mmol·L^-1、誘導(dǎo)溫度在37℃及誘導(dǎo)表達(dá)時間在20 h的優(yōu)化表達(dá)條件時,OcnC蛋白的表達(dá)量較高. 

【文章來源】：中南民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020,39(01)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pET28a(+)-ocnC的構(gòu)建

根據(jù)以上理化性質(zhì)的數(shù)值分析,由于OcnC蛋白的不穩(wěn)定指數(shù)值小于閾值40,可知OcnC蛋白為穩(wěn)定蛋白.由于其帶負(fù)電荷氨基酸數(shù)大于帶正電荷氨基酸數(shù),可推斷OcnC蛋白為酸性蛋白質(zhì).根據(jù)OcnC蛋白的平均親水系數(shù)值(GRVAY)推測可知,OcnC蛋白屬于疏水性蛋白.利用SignalP 4.1 Server在線軟件,預(yù)測OcnC蛋白中無信號肽序列,推測OcnC蛋白屬于非分泌性蛋白.2.3 ocnC基因在大腸桿菌中異源表達(dá)

在16 ℃,0.2 mmol·L-1 IPTG的誘導(dǎo)表達(dá)條件下, 將pET28a(+)-ocnC重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化菌株培養(yǎng)20 h.分別吸取菌液、沉淀和上清進(jìn)行SDS-PAGE電泳,結(jié)果如圖4所示.與對照含pET28a(+)質(zhì)粒E. coli BL21(DE3)菌株對比,在40.0～55.0 kDa之間有OcnC蛋白的表達(dá). 沉淀中OcnC蛋白濃度較高,上清中OcnC蛋白濃度較少.2.4 不同濃度IPTG對OcnC蛋白表達(dá)量的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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