液泡加工酶（VPE）是負(fù)責(zé)植物液泡內(nèi)蛋白質(zhì)加工和激活的一種半胱氨酸蛋白酶。在植物中,VPE通過(guò)液泡降解介導(dǎo)的細(xì)胞死亡調(diào)控PCD。絨氈層的PCD是花粉的發(fā)育的前提條件,許多轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控花藥的分化和絨氈層細(xì)胞的發(fā)育。先前的研究顯示βVPE的表達(dá)量在spl/nzz和ems1/exs的突變體中顯著的下調(diào),在tdf1突變體中表達(dá)量上調(diào),這就暗示了βVPE可能參與了絨氈層的降解過(guò)程。木質(zhì)部細(xì)胞的分化是維管植物的典型PCD,液泡膜的破碎是TE細(xì)胞程序化死亡的標(biāo)志性事件。先前的研究表明,在擬南芥γvpe突變體中,由于yVPE的缺失導(dǎo)致了擬南芥葉片受到TMV侵染時(shí)液泡降解的延時(shí),因此yVPE可能在擬南芥木質(zhì)部的分化過(guò)程中起著重要的作用。基于以上結(jié)果,本論文以βvpe突變體為實(shí)驗(yàn)材料研究βVPE在花藥發(fā)育過(guò)程中的作用,以γvpe突變體為實(shí)驗(yàn)材料研究γVPE在莖發(fā)育過(guò)程中的作用。主要研究結(jié)果如下:（1）βVPE在花藥發(fā)育過(guò)程中的研究。實(shí)時(shí)定量PCR和βVPE啟動(dòng)子GUS染色結(jié)果表明,βVPE特異的在絨氈層發(fā)育的5-8時(shí)期表達(dá),在第8時(shí)期完全轉(zhuǎn)化為成熟酶。βvpe突變體的石蠟切片和透射電鏡結(jié)果表明,絨氈層細(xì)胞... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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圖２－１突變體ＣＳ＿１００７４１２和ＳＡＩＬ＿５０＿Ｆ１２的Ｔ－ＤＮＡ插入位置示意圖??Ｔ－ＤＮＡ插入位點(diǎn)位于士（５２７７０的啟動(dòng)子上；黑色長(zhǎng)方形表外顯子，兩黑色長(zhǎng)方形中間的??

ＣＳ＿１００７４１２－ＲＰ有電泳條帶出現(xiàn)（圖２－２）。我們使用純合體植株的Ｔ３代種子作為??實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行進(jìn)一步的分析。??ＷＴ?ＷＴ?Ｍ?Ｈ??議??圖２－２?ＰＣＲ檢測(cè)突變純合體擬南芥??ＷＴ：野生型；Ｍ：純合突變體；Ｈ：雜合體。??Ｆｉｇ．?２－２Ｔｈｅ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ?ｍｕｔａｎｔ?Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｂｙ?ＰＣＲ??ＷＴ：?ｗｉｌｄ?ｔｙｐｅ；?Ｍ：?ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ?ｐｌａｎｔｓ；?Ｈ：?ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ?ｐｌａｎｔｓ．??２．１．４．２々ｖｐｅ突變體中々ＫＰＥ基因的表達(dá)量??在得到突變體植株ＣＳ＿１００７４１２和ＳＡＩＬ＿５０＿Ｆ１２的純合體Ｔ３代種子后，為了??檢測(cè)夕五基因在突變體中的表達(dá)量是否被抑制，選�。茫樱撸保埃埃罚矗保埠停樱粒桑蹋撸担埃撸疲保�??純合體植株和野生型植株第７－８時(shí)期的花苞提取總ＲＮＡ，使用Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ技術(shù)??來(lái)檢測(cè)基因的表達(dá)量，花藥時(shí)期的劃分參照Ｓａｎｄｅｒｓ等的１９９９年的研宄論文??（Ｓａｎｄｅｒｓ?ｅｔ?ａｌ．，?１９９９）。??。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明（圖２－３），與野生型相比突變體植株中基因幾乎沒(méi)有表??達(dá)

ＣＳ－１００７４１２?ＳＡＩＬ?５０?Ｆ１２?ＷＴ??圖２－３?Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ檢測(cè)基因在野生型植株和突變體植株７－８花粉中的表達(dá)??Ｆｉｇ．?２－３?ｑＲＴ－ＰＣＲ?ｏｆ?ＰＶＰＥ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｍｕｔａｎｔ?ｂｕｄ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ａｔ?７－８?ｓｔａｇｅｓ??２．１．４．３戶突變體的花粉活力??在擬南芥的生長(zhǎng)過(guò)程中，突變體和野生型種子的萌發(fā)率基本是一致的，并且突??變體和野生型的生長(zhǎng)狀態(tài)也基本一致，開(kāi)花時(shí)間、抽薹、果莢的形成和種子的數(shù)量??沒(méi)有差別。為了觀察突變體與野生型植株花粉是否有區(qū)別，檢測(cè)了兩者成熟花粉的??的萌發(fā)率。在突變體植株中，花粉的萌發(fā)率是４５．１３％?（１１６?ｏｆ?２５７，?Ｐ＜０．０５）；而在野??生型植株中


本文編號(hào)：3513990