液泡加工酶（VPE）是負責植物液泡內蛋白質加工和激活的一種半胱氨酸蛋白酶。在植物中,VPE通過液泡降解介導的細胞死亡調控PCD。絨氈層的PCD是花粉的發(fā)育的前提條件,許多轉錄因子調控花藥的分化和絨氈層細胞的發(fā)育。先前的研究顯示βVPE的表達量在spl/nzz和ems1/exs的突變體中顯著的下調,在tdf1突變體中表達量上調,這就暗示了βVPE可能參與了絨氈層的降解過程。木質部細胞的分化是維管植物的典型PCD,液泡膜的破碎是TE細胞程序化死亡的標志性事件。先前的研究表明,在擬南芥γvpe突變體中,由于yVPE的缺失導致了擬南芥葉片受到TMV侵染時液泡降解的延時,因此yVPE可能在擬南芥木質部的分化過程中起著重要的作用�；谝陨辖Y果,本論文以βvpe突變體為實驗材料研究βVPE在花藥發(fā)育過程中的作用,以γvpe突變體為實驗材料研究γVPE在莖發(fā)育過程中的作用。主要研究結果如下:（1）βVPE在花藥發(fā)育過程中的研究。實時定量PCR和βVPE啟動子GUS染色結果表明,βVPE特異的在絨氈層發(fā)育的5-8時期表達,在第8時期完全轉化為成熟酶。βvpe突變體的石蠟切片和透射電鏡結果表明,絨氈層細胞... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學北京市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１突變體ＣＳ＿１００７４１２和ＳＡＩＬ＿５０＿Ｆ１２的Ｔ－ＤＮＡ插入位置示意圖??Ｔ－ＤＮＡ插入位點位于士（５２７７０的啟動子上；黑色長方形表外顯子，兩黑色長方形中間的??

ＣＳ＿１００７４１２－ＲＰ有電泳條帶出現(xiàn)（圖２－２）。我們使用純合體植株的Ｔ３代種子作為??實驗材料進行進一步的分析。??ＷＴ?ＷＴ?Ｍ?Ｈ??議??圖２－２?ＰＣＲ檢測突變純合體擬南芥??ＷＴ：野生型；Ｍ：純合突變體；Ｈ：雜合體。??Ｆｉｇ．?２－２Ｔｈｅ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｈｏｍｏｚｙｇｏｔｅ?ｍｕｔａｎｔ?Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｂｙ?ＰＣＲ??ＷＴ：?ｗｉｌｄ?ｔｙｐｅ；?Ｍ：?ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ?ｐｌａｎｔｓ；?Ｈ：?ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ?ｐｌａｎｔｓ．??２．１．４．２々ｖｐｅ突變體中々ＫＰＥ基因的表達量??在得到突變體植株ＣＳ＿１００７４１２和ＳＡＩＬ＿５０＿Ｆ１２的純合體Ｔ３代種子后，為了??檢測夕五基因在突變體中的表達量是否被抑制，選�。茫樱撸保埃埃罚矗保埠停樱粒桑蹋撸担埃撸疲保�??純合體植株和野生型植株第７－８時期的花苞提取總ＲＮＡ，使用Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ技術??來檢測基因的表達量，花藥時期的劃分參照Ｓａｎｄｅｒｓ等的１９９９年的研宄論文??（Ｓａｎｄｅｒｓ?ｅｔ?ａｌ．，?１９９９）。??。實驗結果表明（圖２－３），與野生型相比突變體植株中基因幾乎沒有表??達

ＣＳ－１００７４１２?ＳＡＩＬ?５０?Ｆ１２?ＷＴ??圖２－３?Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ?ＰＣＲ檢測基因在野生型植株和突變體植株７－８花粉中的表達??Ｆｉｇ．?２－３?ｑＲＴ－ＰＣＲ?ｏｆ?ＰＶＰＥ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｍｕｔａｎｔ?ｂｕｄ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ａｔ?７－８?ｓｔａｇｅｓ??２．１．４．３戶突變體的花粉活力??在擬南芥的生長過程中，突變體和野生型種子的萌發(fā)率基本是一致的，并且突??變體和野生型的生長狀態(tài)也基本一致，開花時間、抽薹、果莢的形成和種子的數(shù)量??沒有差別。為了觀察突變體與野生型植株花粉是否有區(qū)別，檢測了兩者成熟花粉的??的萌發(fā)率。在突變體植株中，花粉的萌發(fā)率是４５．１３％?（１１６?ｏｆ?２５７，?Ｐ＜０．０５）；而在野??生型植株中


本文編號：3513990