背景:有研究結(jié)果表明,正常的細(xì)胞組織在體外培養(yǎng)時(shí)可以正常生長和分裂。但經(jīng)過一段時(shí)間后,細(xì)胞就會(huì)失去生長和分裂的能力,最后走向衰老死亡,這樣的現(xiàn)象便限制了對細(xì)胞的研究。但是永生化的細(xì)胞能夠?yàn)榧?xì)胞、腫瘤、組織工程等領(lǐng)域的研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。因此,怎樣才能使體外正常狀態(tài)下目的細(xì)胞成為永生化的細(xì)胞成為研究者們研究的重點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn),端粒酶的活性主要受TERT基因調(diào)控,當(dāng)TERT活性增加時(shí),將促進(jìn)端粒酶利用自身作為模板合成端粒DNA,來彌補(bǔ)染色體復(fù)制造成的端粒長度的損失。使細(xì)胞獲得無限增殖能力,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞永生化的目的。因此也可以說明TERT的活性是使細(xì)胞永生化的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn),通過脂質(zhì)轉(zhuǎn)染法能將外源hTERT基因轉(zhuǎn)染進(jìn)目的細(xì)胞內(nèi)來提高h(yuǎn)TERT的表達(dá)量,也能通過CRISPR/dCas9與TERT的轉(zhuǎn)錄激活因子結(jié)合的方法來提高內(nèi)源細(xì)胞TERT的表達(dá)。目的:通過病毒感染的方法將帶有hTERT的慢病毒感染原代細(xì)胞,或者使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將hTERT慢病毒載體轉(zhuǎn)染進(jìn)原代細(xì)胞,使原代細(xì)胞中外源hTERT表達(dá)量上升,來促進(jìn)端粒酶的活性,進(jìn)而維持染色體端粒的長度,使正常狀態(tài)下快速死亡的原代細(xì)胞生長周期變長甚... 

【文章來源】：東華大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pLenti-CMV-hTERT-3FLAG-P2A-EGFP構(gòu)建流程

圖 2-2：CRISPR-dCas9-SP1 工作原理圖）雙核酸酶切失活的 dCas9 載體的構(gòu)建通過查文獻(xiàn)，序列比對，我們發(fā)現(xiàn)雙酶切失活的 dCas9 與本實(shí)驗(yàn)室保

圖 3-1 帶有同源臂的 hTERT 片段的獲得帶有同源臂的 hTERT M:DNAMakeri-CMV-mcs-3FLAG-P2A-EGFP 載體線性化處理及驗(yàn)證ti-CMV-hTERT-3FLAG-P2A-EGFP載體用ECORI和Ba

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人永生化細(xì)胞系模型建立的方法[J]. 汪廷樂,宋萌.  上�？谇会t(yī)學(xué). 2010(02)
[2]永生化肝細(xì)胞研究的現(xiàn)狀及其進(jìn)展[J]. 汪濤,劉景豐.  腹部外科. 2008(06)
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碩士論文
[1]攜帶hTERT-P2A-EGFP基因的真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定[D]. 陳曉娜.吉林大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3511976