aMPV、IBV、NDV三重RT-PCR以及aMPV N蛋白的表達(dá)和間接ELISA方法的建立與應(yīng)用
發(fā)布時(shí)間：2021-11-08 10:14
禽偏肺病毒（Avian metapneumovirus,a MPV）主要引起雞和火雞的上呼吸道感染,造成蛋雞產(chǎn)蛋率和蛋品質(zhì)下降。近年發(fā)現(xiàn)a MPV對(duì)番鴨等其它禽類也存在致病性。a MPV單一感染致死率不高,但會(huì)導(dǎo)致免疫力下降,繼發(fā)其它疾病,增加死亡率。目前除大洋洲外均出現(xiàn)a MPV感染的報(bào)道,該病嚴(yán)重威脅了世界范圍內(nèi)的養(yǎng)禽業(yè)。血清學(xué)調(diào)查表明目前包括廣西在內(nèi)的多個(gè)地區(qū)養(yǎng)雞場(chǎng)的雞群普遍存在a MPV感染,且不同品種、性別和用途的雞群均感染嚴(yán)重,部分種雞群陽(yáng)性感染率甚至達(dá)到100%。a MPV分離較為困難,其感染雞的臨床癥狀、解剖病變又與傳染性支氣管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）和新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）相似,傳統(tǒng)的病理解剖觀察很難區(qū)分。此外,近年來(lái)a MPV、IBV和NDV混合感染呈多發(fā)態(tài)勢(shì)。因此,建立同時(shí)檢測(cè)a MPV、IBV和NDV的診斷方法和了解該病在雞群的流行情況非常重要。本課題組前期已建立了a MPV的RT-PCR檢測(cè)方法,因此,本研究在此基礎(chǔ)上建立a MPV、IBV及NDV三重RT-PCR檢測(cè)...
【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
aMPV多形性病毒粒子電鏡圖
廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文aMPV、IBV、NDV三重RT-PCR以及aMPVN蛋白的表達(dá)和間接ELISA方法的建立與應(yīng)用3的8個(gè)編碼蛋白中是較為保守的。圖1-2偏肺病毒屬病毒粒子和基因組結(jié)構(gòu)圖Fig.1-2Schematicofmetapneumovirusvirionandgenome1.1.4禽偏肺病毒的復(fù)制與侵染機(jī)制病毒的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄從3′端先導(dǎo)區(qū)開始，基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平逐漸下降[13]。感染宿主細(xì)胞時(shí)，aMPV首先通過(guò)G蛋白和SH蛋白的介導(dǎo)作用吸附到細(xì)胞的表面，然后F蛋白介導(dǎo)其病毒囊膜與細(xì)胞表面受體結(jié)合，并將核衣殼釋放到細(xì)胞質(zhì)中。隨后，侵染的核衣殼與蛋白N、P和L脫離，作為模板開始轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。首先負(fù)鏈RNA基因組在RNA聚合酶的作用下轉(zhuǎn)錄為mRNA進(jìn)一步翻譯為病毒蛋白和合成子代負(fù)鏈RNA[14]。病毒復(fù)制完成后，新復(fù)制的基因組RNA與新合成的蛋白N、P、L和M2等會(huì)形成核衣殼，由M蛋白介導(dǎo)其轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜，而新的合成的F、G和SH蛋白會(huì)通過(guò)高爾基體的加工變?yōu)槌墒斓鞍�，然后�?jīng)過(guò)F蛋白的介導(dǎo)以出芽的形式轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞膜。進(jìn)而使感染的細(xì)胞與鄰近的細(xì)胞發(fā)生融合，使病毒核酸擴(kuò)散，完成病毒的增殖。
廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文aMPV、IBV、NDV三重RT-PCR以及aMPVN蛋白的表達(dá)和間接ELISA方法的建立與應(yīng)用41.2禽偏肺病毒的流行病學(xué)1.2.1禽偏肺病毒的宿主與易感動(dòng)物aMPV的天然宿主是火雞和雞，不同日齡都可以感染。雉雞、鴿子、鵝、鴨子、麻雀、燕子和海鷗等雖然對(duì)病毒不易感，沒(méi)有明顯臨床癥狀，但通過(guò)多種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法發(fā)現(xiàn)均有帶毒的現(xiàn)象[15-19]。另外，實(shí)驗(yàn)室用美國(guó)明尼蘇達(dá)州火雞C亞型aMPV分離株進(jìn)行aMPV傳播研究，小鼠在感染14d后仍能檢測(cè)到病毒核酸。C亞型aMPV是潛在的人畜共患病原。1.2.2禽偏肺病毒的傳播與分布aMPV主要通過(guò)與患病雞群直接接觸或者空氣、鳥類遷徙、飼養(yǎng)器材、工作人員、轉(zhuǎn)群等各種間接接觸的水平方式傳播。雖然在產(chǎn)蛋雞的生殖道中檢測(cè)出病毒，但還沒(méi)有確足的證據(jù)支持aMPV可以通過(guò)垂直傳播[20,21]。養(yǎng)殖場(chǎng)aMPV的爆發(fā)通常與家禽的飼養(yǎng)密度和生物安全等息息相關(guān)。而從最開始aMPV報(bào)道的南非到歐洲，病毒最初的傳染源極有可能是遷徙的候鳥。除大洋洲以外的其他國(guó)家和地區(qū)的所有飼養(yǎng)家禽的區(qū)域都曾報(bào)道過(guò)aMPV的存在或感染。具體分布情況詳見圖1-3。圖1-3aMPV世界分布圖Fig.1-3WorlddistributionofaMPV1999年，沈瑞忠團(tuán)隊(duì)從黑龍江某肉雞場(chǎng)患腫頭綜合癥的雞中分離到一株
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]禽偏肺病毒研究進(jìn)展[J]. 姜楠,姜利建,孫福亮,王楷宬,王素春. 中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2020(03)
[2]非洲豬瘟病毒DP96R蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[J]. 王西西,吳映彤,吳競(jìng),陳鴻軍,郭曉宇,朱鴻飛. 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2020(01)
[3]規(guī)模化肉雞場(chǎng)鼻氣管鳥桿菌、禽呼腸孤病毒和禽偏肺病毒感染狀況的血清學(xué)調(diào)查[J]. 付岳林,崔明仙,白曉,李連敏,呂建國(guó),張誠(chéng),陳立功,郝丹,王學(xué)靜,劉聚祥. 今日畜牧獸醫(yī). 2019(02)
[4]禽偏肺病毒Taqman熒光定量PCR方法的建立及應(yīng)用[J]. 劉佳佳,陳峰,覃健萍,周慶豐,魯俊鵬,操勝,王占新,田野. 中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2017(06)
[5]廣西地區(qū)規(guī)�；u場(chǎng)禽偏肺病毒感染情況的血清學(xué)調(diào)查[J]. 張麗華,李和鳴,袁園,董志華,王海勇,唐寧,韋平,韋天超,黃騰,磨美蘭. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(06)
[6]安徽省部分地區(qū)雞群禽偏肺病毒感染的血清學(xué)調(diào)查[J]. 張丹俊,戴銀,趙瑞宏,胡曉苗,沈?qū)W懷,侯宏艷,潘孝成,周學(xué)利,朱傳民. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(02)
[7]2012年—2015年我國(guó)部分地區(qū)禽偏肺病毒的分子流行病學(xué)分析[J]. 朱艷梅,宮曉,郭偉偉,徐保娟,李陸梅,郎楓,劉紅祥,劉東,范根成. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2016(10)
[8]禽偏肺病毒C型核衣殼N蛋白的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)及鑒定[J]. 李子璇,韋莉,王菁,朱姍姍,張春燕,柳舒航,全榮,閻旭,陳武,劉爵. 北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào). 2014(04)
[9]A型禽偏肺病毒F蛋白的原核表達(dá)與抗原性分析[J]. 閻旭,韋莉,王菁,朱姍姍,張春燕,柳舒航,全榮,李子璇,劉浩,劉爵. 中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2014(03)
[10]1株B亞型禽偏肺病毒的分離與鑒定[J]. 薛聰,唐熠,陳琳,崔京騰,歐全賓,孫曉艷,裴蘋蘋,刁有祥. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(01)
博士論文
[1]禽偏肺病毒F蛋白介導(dǎo)膜融合及抑制β-干擾素機(jī)制研究[D]. 贠炳嶺.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[2]禽偏肺病毒mRNA甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷弱毒疫苗株的研究[D]. 孫靜.浙江大學(xué) 2014
[3]IBV，NDV，AIV H9感染雞氣管比較蛋白質(zhì)組分析及雞galectin CG-1B在NDV感染中作用機(jī)制的研究[D]. 孫軍峰.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[4]表達(dá)C亞型禽偏肺病毒糖蛋白和融合蛋白的重組新城疫病毒二價(jià)苗的構(gòu)建及免疫效力評(píng)價(jià)[D]. 胡海霞.吉林大學(xué) 2011
碩士論文
[1]禽偏肺病毒通用型抗原和抗體檢測(cè)方法的建立[D]. 王貝貝.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]禽偏肺病毒的分離鑒定及Nested RT-PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[D]. 薛聰.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]三重PCR檢測(cè)雞肉中常見病原菌的研究[D]. 潘彤媛.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]禽偏肺病毒檢測(cè)方法的建立及流行病學(xué)調(diào)查[D]. 贠炳嶺.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[5]禽肺病毒F蛋白的原核表達(dá)及其間接ELISA方法的建立[D]. 閻旭.天津科技大學(xué) 2013
[6]雞病毒性呼吸道病原多重RT-PCR檢測(cè)方法的建立[D]. 姚蓉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]禽偏肺病毒檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[D]. 陳琳.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
本文編號(hào)：3483531
【文章來(lái)源】：廣西大學(xué)廣西壯族自治區(qū) 211工程院校
【文章頁(yè)數(shù)】：90 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
aMPV多形性病毒粒子電鏡圖
廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文aMPV、IBV、NDV三重RT-PCR以及aMPVN蛋白的表達(dá)和間接ELISA方法的建立與應(yīng)用3的8個(gè)編碼蛋白中是較為保守的。圖1-2偏肺病毒屬病毒粒子和基因組結(jié)構(gòu)圖Fig.1-2Schematicofmetapneumovirusvirionandgenome1.1.4禽偏肺病毒的復(fù)制與侵染機(jī)制病毒的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄從3′端先導(dǎo)區(qū)開始，基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平逐漸下降[13]。感染宿主細(xì)胞時(shí)，aMPV首先通過(guò)G蛋白和SH蛋白的介導(dǎo)作用吸附到細(xì)胞的表面，然后F蛋白介導(dǎo)其病毒囊膜與細(xì)胞表面受體結(jié)合，并將核衣殼釋放到細(xì)胞質(zhì)中。隨后，侵染的核衣殼與蛋白N、P和L脫離，作為模板開始轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。首先負(fù)鏈RNA基因組在RNA聚合酶的作用下轉(zhuǎn)錄為mRNA進(jìn)一步翻譯為病毒蛋白和合成子代負(fù)鏈RNA[14]。病毒復(fù)制完成后，新復(fù)制的基因組RNA與新合成的蛋白N、P、L和M2等會(huì)形成核衣殼，由M蛋白介導(dǎo)其轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞膜，而新的合成的F、G和SH蛋白會(huì)通過(guò)高爾基體的加工變?yōu)槌墒斓鞍�，然后�?jīng)過(guò)F蛋白的介導(dǎo)以出芽的形式轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞膜。進(jìn)而使感染的細(xì)胞與鄰近的細(xì)胞發(fā)生融合，使病毒核酸擴(kuò)散，完成病毒的增殖。
廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文aMPV、IBV、NDV三重RT-PCR以及aMPVN蛋白的表達(dá)和間接ELISA方法的建立與應(yīng)用41.2禽偏肺病毒的流行病學(xué)1.2.1禽偏肺病毒的宿主與易感動(dòng)物aMPV的天然宿主是火雞和雞，不同日齡都可以感染。雉雞、鴿子、鵝、鴨子、麻雀、燕子和海鷗等雖然對(duì)病毒不易感，沒(méi)有明顯臨床癥狀，但通過(guò)多種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法發(fā)現(xiàn)均有帶毒的現(xiàn)象[15-19]。另外，實(shí)驗(yàn)室用美國(guó)明尼蘇達(dá)州火雞C亞型aMPV分離株進(jìn)行aMPV傳播研究，小鼠在感染14d后仍能檢測(cè)到病毒核酸。C亞型aMPV是潛在的人畜共患病原。1.2.2禽偏肺病毒的傳播與分布aMPV主要通過(guò)與患病雞群直接接觸或者空氣、鳥類遷徙、飼養(yǎng)器材、工作人員、轉(zhuǎn)群等各種間接接觸的水平方式傳播。雖然在產(chǎn)蛋雞的生殖道中檢測(cè)出病毒，但還沒(méi)有確足的證據(jù)支持aMPV可以通過(guò)垂直傳播[20,21]。養(yǎng)殖場(chǎng)aMPV的爆發(fā)通常與家禽的飼養(yǎng)密度和生物安全等息息相關(guān)。而從最開始aMPV報(bào)道的南非到歐洲，病毒最初的傳染源極有可能是遷徙的候鳥。除大洋洲以外的其他國(guó)家和地區(qū)的所有飼養(yǎng)家禽的區(qū)域都曾報(bào)道過(guò)aMPV的存在或感染。具體分布情況詳見圖1-3。圖1-3aMPV世界分布圖Fig.1-3WorlddistributionofaMPV1999年，沈瑞忠團(tuán)隊(duì)從黑龍江某肉雞場(chǎng)患腫頭綜合癥的雞中分離到一株
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]禽偏肺病毒研究進(jìn)展[J]. 姜楠,姜利建,孫福亮,王楷宬,王素春. 中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2020(03)
[2]非洲豬瘟病毒DP96R蛋白的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[J]. 王西西,吳映彤,吳競(jìng),陳鴻軍,郭曉宇,朱鴻飛. 中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào). 2020(01)
[3]規(guī)模化肉雞場(chǎng)鼻氣管鳥桿菌、禽呼腸孤病毒和禽偏肺病毒感染狀況的血清學(xué)調(diào)查[J]. 付岳林,崔明仙,白曉,李連敏,呂建國(guó),張誠(chéng),陳立功,郝丹,王學(xué)靜,劉聚祥. 今日畜牧獸醫(yī). 2019(02)
[4]禽偏肺病毒Taqman熒光定量PCR方法的建立及應(yīng)用[J]. 劉佳佳,陳峰,覃健萍,周慶豐,魯俊鵬,操勝,王占新,田野. 中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2017(06)
[5]廣西地區(qū)規(guī)�；u場(chǎng)禽偏肺病毒感染情況的血清學(xué)調(diào)查[J]. 張麗華,李和鳴,袁園,董志華,王海勇,唐寧,韋平,韋天超,黃騰,磨美蘭. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(06)
[6]安徽省部分地區(qū)雞群禽偏肺病毒感染的血清學(xué)調(diào)查[J]. 張丹俊,戴銀,趙瑞宏,胡曉苗,沈?qū)W懷,侯宏艷,潘孝成,周學(xué)利,朱傳民. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2017(02)
[7]2012年—2015年我國(guó)部分地區(qū)禽偏肺病毒的分子流行病學(xué)分析[J]. 朱艷梅,宮曉,郭偉偉,徐保娟,李陸梅,郎楓,劉紅祥,劉東,范根成. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2016(10)
[8]禽偏肺病毒C型核衣殼N蛋白的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)及鑒定[J]. 李子璇,韋莉,王菁,朱姍姍,張春燕,柳舒航,全榮,閻旭,陳武,劉爵. 北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào). 2014(04)
[9]A型禽偏肺病毒F蛋白的原核表達(dá)與抗原性分析[J]. 閻旭,韋莉,王菁,朱姍姍,張春燕,柳舒航,全榮,李子璇,劉浩,劉爵. 中國(guó)獸醫(yī)雜志. 2014(03)
[10]1株B亞型禽偏肺病毒的分離與鑒定[J]. 薛聰,唐熠,陳琳,崔京騰,歐全賓,孫曉艷,裴蘋蘋,刁有祥. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2014(01)
博士論文
[1]禽偏肺病毒F蛋白介導(dǎo)膜融合及抑制β-干擾素機(jī)制研究[D]. 贠炳嶺.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2016
[2]禽偏肺病毒mRNA甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷弱毒疫苗株的研究[D]. 孫靜.浙江大學(xué) 2014
[3]IBV，NDV，AIV H9感染雞氣管比較蛋白質(zhì)組分析及雞galectin CG-1B在NDV感染中作用機(jī)制的研究[D]. 孫軍峰.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[4]表達(dá)C亞型禽偏肺病毒糖蛋白和融合蛋白的重組新城疫病毒二價(jià)苗的構(gòu)建及免疫效力評(píng)價(jià)[D]. 胡海霞.吉林大學(xué) 2011
碩士論文
[1]禽偏肺病毒通用型抗原和抗體檢測(cè)方法的建立[D]. 王貝貝.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]禽偏肺病毒的分離鑒定及Nested RT-PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[D]. 薛聰.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]三重PCR檢測(cè)雞肉中常見病原菌的研究[D]. 潘彤媛.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]禽偏肺病毒檢測(cè)方法的建立及流行病學(xué)調(diào)查[D]. 贠炳嶺.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[5]禽肺病毒F蛋白的原核表達(dá)及其間接ELISA方法的建立[D]. 閻旭.天津科技大學(xué) 2013
[6]雞病毒性呼吸道病原多重RT-PCR檢測(cè)方法的建立[D]. 姚蓉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]禽偏肺病毒檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[D]. 陳琳.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
本文編號(hào)：3483531
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