巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)是應(yīng)用最為廣泛的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)之一。目前使用最多的外源蛋白表達(dá)策略是使用整合型質(zhì)粒;游離型質(zhì)粒由于其高不穩(wěn)定性,在畢赤酵母中的應(yīng)用受到極大的限制。將ARS/CEN等元件連接到pPIC9K載體上,構(gòu)建能夠自主復(fù)制的游離型質(zhì)粒pPIC9K-ARS/CEN,通過傳代培養(yǎng)檢測質(zhì)粒丟失的方法探究畢赤酵母在細(xì)胞傳代培養(yǎng)過程中游離質(zhì)粒的穩(wěn)定性。無選擇壓力情況下,包含ARS/CEN元件的游離質(zhì)粒在細(xì)胞培養(yǎng)10代之前具有極高的穩(wěn)定性,隨后游離質(zhì)粒開始丟失,到第20代質(zhì)粒丟失率高達(dá)92.94%。該研究結(jié)果為構(gòu)建穩(wěn)定的游離質(zhì)粒畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)提供了良好的支撐,并提供了切實(shí)可行的質(zhì)粒消除方法,為畢赤酵母運(yùn)用CRISPR/Cas9系統(tǒng)進(jìn)行多基因編輯提供了良好的研究基礎(chǔ)。

【文章來源】： 生物學(xué)雜志. 2020,37(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑與儀器
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 基因合成
        1.2.2 游離型質(zhì)粒pPIC9K-ARS/CEN的構(gòu)建
        1.2.3 畢赤酵母GS115感受態(tài)的制備
        1.2.4 畢赤酵母GS115陽性菌株的篩選與鑒定
        1.2.5 畢赤酵母基因組的提取
        1.2.6 畢赤酵母GS115不同代數(shù)生長曲線的測定
        1.2.7 畢赤酵母GS115質(zhì)粒丟失率的測定
2 結(jié)果
    2.1 pPIC9K-ARS/CEN的構(gòu)建
    2.2 畢赤酵母GS115陽性轉(zhuǎn)化子的挑選與驗(yàn)證
    2.3 游離質(zhì)粒pPIC9K-ARS/CEN的傳代生長情況
    2.4 游離質(zhì)粒pPIC9K-ARS/CEN傳代丟失率及驗(yàn)證
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用游離型表達(dá)質(zhì)粒強(qiáng)化畢赤酵母表達(dá)木聚糖酶 [J]. 潘陽,吳丹,吳敬.  生物工程學(xué)報(bào). 2018(05)

碩士論文
[1]甘油轉(zhuǎn)運(yùn)體1缺失型畢赤酵母搖瓶發(fā)酵優(yōu)化及甘油轉(zhuǎn)運(yùn)體2的鑒定[D]. 張震陽.江南大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3482939