發(fā)布時間：2021-11-07 16:52

　　為了研究二穗短柄草BdDREB1-like基因在轉(zhuǎn)基因煙草中的功能,克隆了該基因,并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。該基因開放閱讀框684 bp,編碼228個氨基酸,編碼蛋白的分子量為24.178 ku,只含有一個典型的AP2結(jié)構(gòu)域,屬于AP2/EREBP（APETALA2/ethylene-responsive element binding protein）超家族的DREB家族。多序列比對與進(jìn)化分析顯示它與黑麥ScCBFI的親緣關(guān)系較近。亞細(xì)胞定位分析表明,BdDREB1-like基因定位于細(xì)胞核。將其構(gòu)建到植物表達(dá)載體上,并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入煙草中。PCR和RT-PCR篩選鑒定顯示BdDREB1-like基因不僅整合到煙草基因組中而且還能穩(wěn)定表達(dá)。過氧化氫脅迫條件下,轉(zhuǎn)BdDREB1-like基因煙草幼苗具有較高的發(fā)芽率。為了進(jìn)一步確定BdDREB1-like基因與氧化脅迫的關(guān)系,又對一個月大的轉(zhuǎn)基因煙草進(jìn)行氧化脅迫（MV,甲基紫精）處理。結(jié)果表明,在正常生長條件下,T3轉(zhuǎn)基因株系除了SOD含量外,測定的其他各種生理指標(biāo)均與野生型無顯著差異,T1轉(zhuǎn)基因株系中只有POD和葉綠素含量與野生型... 

【文章來源】：華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2020,35(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

DREB1-like基因的PCR擴(kuò)增(A)、結(jié)構(gòu)(B)與重組載體(C)

用Xba Ⅰ和BamH Ⅰ酶分別雙酶切重組質(zhì)粒pBdDREB1-T改造的植物表達(dá)載體pBI121-GFP,回收目的片段,經(jīng)菌落PCR和測序正確后,獲得植物表達(dá)載體pBI121-BdDREB1-GFP(圖1-C),然后將該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌EHA105中,經(jīng)菌落PCR檢測正確的再通過葉圓盤法轉(zhuǎn)化煙草。轉(zhuǎn)BdDREB1-like基因的煙草經(jīng)卡那霉素篩選后共得抗性苗17株,移栽后剩余12株成活;隨機(jī)挑選7株提取其和野生型煙草基因組的DNA,其中以野生型煙草作為陰性對照進(jìn)行PCR鑒定。BdDREB1-like基因的煙草中有5株擴(kuò)增出預(yù)期大小一致的目的條帶(137 bp),表明BdDREB1-like基因已整合到煙草基因組中(圖4-A)。從初步篩選得到的陽性植株中隨機(jī)選出3株提取RNA,以反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA為模板,利用RT-PCR進(jìn)一步檢測,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因的煙草有2個株系能擴(kuò)增出預(yù)期大小目的條帶(圖4-B),說明BdDREB1-like基因不僅整合到煙草基因組中而且還能穩(wěn)定表達(dá)。圖3 多個物種DREB/CBF蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化分析

多個物種DREB/CBF蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蘋果赤霉素氧化酶基因MdGA2ox8的克隆及功能分析[J]. 李飛鴻,侯應(yīng)軍,李雪涵,余心怡,渠慎春.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(22)
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本文編號：3482211