MicroRNA（miRNA）在生物生理生化進(jìn)程、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞調(diào)亡、響應(yīng)生物和非生物脅迫等方面發(fā)揮重要功能,本試驗(yàn)克隆桑樹miR166f及其前體序列,分析其時(shí)空表達(dá)特性,并構(gòu)建用于瞬時(shí)表達(dá)的miR166f雙元超表達(dá)載體,為桑樹miR166f抗旱功能機(jī)制的進(jìn)一步探究奠定基礎(chǔ)�？寺～@得了桑樹miR166f及其前體序列,pre-miR166f長91 nt,miR166f長21 nt,miR166f在前體的3′臂上,pre-miR166f最小折疊自由能（MEF）為-217.14 kJ/mol,具有典型的植物miRNA前體二級(jí)結(jié)構(gòu)特征;miR166f的5′端上游除了包含典型的具有轉(zhuǎn)錄起始功能的TATA-box和CAAT-box外,還含有多個(gè)脅迫響應(yīng)順式作用元件和一些激素響應(yīng)元件;qRT-PCR分析表明miR166f在桑樹不同組織中的相對(duì)表達(dá)量有較大差異,其中在莖中表達(dá)量最高,在木質(zhì)部中表達(dá)量最低;miR166f在高鹽和干旱脅迫處理?xiàng)l件下均上調(diào)表達(dá),表明該基因參與了桑樹的抗逆響應(yīng)過程;成功構(gòu)建了用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)化表達(dá)的miR166f的雙元超表達(dá)載體pCAMBIA-35S-GUS-miR166f,為桑樹... 

【文章來源】：蠶業(yè)科學(xué). 2020,46(03)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

桑樹miR166f在不同組織中的表達(dá)模式

從桑樹基因組中選取pre-miR166f(scaffold81)5′端上游3 000 bp的序列，利用PlantCARE在線生物信息學(xué)預(yù)測(cè)軟件對(duì)其上游序列進(jìn)行分析，結(jié)果如表2所示，miR166f上游啟動(dòng)子序列除了包含典型的具有轉(zhuǎn)錄起始功能的TATA-box和CAAT-box外，還含有多個(gè)與脅迫響應(yīng)相關(guān)的順式作用元件，如干旱響應(yīng)（MBS）、高溫應(yīng)答（HSE）、抗氧化反應(yīng)（ARE）、真菌誘導(dǎo)響應(yīng)（Box-W1）和綜合防御應(yīng)答（TC-rich repeats）等；另外還包含一些激素響應(yīng)元件，如生長素（AuxRR-core）、茉莉酸（CGTCA-motif/TGACG-motif）、赤霉素（P-box）和水楊酸（TCA-element）等。這些結(jié)果表明桑樹miR166f可能在桑樹響應(yīng)生物和非生物脅迫、調(diào)控脅迫相關(guān)基因表達(dá)方面發(fā)揮重要作用。2.4 miR166f靶基因的鑒定驗(yàn)證

桑樹miR166f在干旱和高鹽等非生物脅迫處理下的表達(dá)變化情況見圖5。由圖5-A可知，桑樹miR166f對(duì)干旱脅迫的反應(yīng)很強(qiáng)烈，隨著脅迫時(shí)間的延長，miR166f表達(dá)量逐漸增高，到第10天時(shí)達(dá)到最高值，為正常條件下的4.33倍，有極顯著差異（P≤0.01），到第15天時(shí)，表達(dá)量驟減為正常條件下的2.05倍，可以看出干旱脅迫能促使桑樹miR166f表達(dá)量的增加。在高鹽脅迫誘導(dǎo)下（圖5-B），桑樹miR166f的表達(dá)量先是逐漸升高，到第4天時(shí)升高到最大值，為正常條件下的7.74倍，差異極顯著（P≤0.01），之后緩慢降低，到第10天時(shí)miR166f表達(dá)量降到最低，為正常條件下的1.98倍，在整個(gè)高鹽脅迫過程中，桑樹miR166f的表達(dá)量都是高于正常條件下的，說明桑樹可以通過增加miR166f的表達(dá)量來適應(yīng)高鹽脅迫。2.7 miR166f雙元超表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]龍眼miR166家族的分子進(jìn)化特性及時(shí)空表達(dá)分析[J]. 林玉玲,張清林,曾友競(jìng),陳曉慧,張梓浩,陳裕坤,賴鐘雄.  園藝學(xué)報(bào). 2017(12)
[2]桑樹基因組計(jì)劃與桑樹產(chǎn)業(yè)[J]. 何寧佳,趙愛春,秦儉,曾其偉,向仲懷.  蠶業(yè)科學(xué). 2012(01)

碩士論文
[1]桑樹miRn51與靶基因研究及桑樹瞬時(shí)表達(dá)體系的建立[D]. 張大燕.西南大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3479754