為了明確活性藍(lán)4（RB-4）的親和作用,通過紫外吸收光譜、熒光光譜以及分子對(duì)接方法,研究了RB-4與牛血清白蛋白（BSA）之間相互作用的分子機(jī)制。研究結(jié)果表明:RB-4與BSA的相互作用使BSA內(nèi)部疏水性基團(tuán)暴露。RB-4與BSA通過靜態(tài)淬滅機(jī)制反應(yīng),結(jié)合位點(diǎn)數(shù)約為2。結(jié)合過程的熱力學(xué)參數(shù)△G<0,且△H>0,△S>0,表明結(jié)合過程是自發(fā)放熱過程且主要作用力為疏水作用力。RB-4與BSA之間的結(jié)合導(dǎo)致BSA的三級(jí)結(jié)構(gòu)被破壞,從而使酪氨酸殘基和色氨酸殘基周圍微環(huán)境的疏水性增強(qiáng)。BSA與RB-4之間的主要氨基酸作用位點(diǎn)為Phe-567、Ala-568、Ala-510、Val-575、Pro-572、Phe-508和Phe-506,同時(shí)還存在一定的靜電作用和氫鍵作用。 

【文章來源】：河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,41(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

RB-4與BSA相互作用的同步熒光光譜

三維熒光光譜能準(zhǔn)確、可靠地檢驗(yàn)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和微環(huán)境變化。圖4為RB-4與BSA相互作用的三維熒光光譜。由圖4可知:在兩個(gè)體系中存在特征為△λem=△λex的瑞利散射,即圖4中所示的“山脊”峰(峰A)[22]。另外,對(duì)于BSA(見圖4a),在△λem=345 nm處存在峰B,這是由BSA中氨基酸的π-π*躍遷所造成的。而對(duì)于RB-4與BSA結(jié)合的反應(yīng)體系(見圖4b),峰B的熒光強(qiáng)度顯著降低,且λem發(fā)生輕微藍(lán)移(λem=343 nm),表明在酪氨酸殘基和色氨酸殘基周圍微環(huán)境中的疏水性增強(qiáng),這與同步熒光光譜的結(jié)果一致。2.7 分子對(duì)接

圖5為RB-4與BSA的分子對(duì)接模型。圖5a顯示了RB-4與BSA分子對(duì)接的整體結(jié)果,在此構(gòu)象下,結(jié)合自由能最低。RB-4與BSA對(duì)接時(shí),周邊存在11個(gè)氨基酸殘基,包括離子型氨基酸殘基:Glu-564和His-509;疏水型殘基:Phe-567、Ala-568、Ala-510、Val-575、Pro-572、Phe-508和Phe-506;親水型殘基:Gly-571和Thr-507。其中,Phe-508、Ala-510、Glu-564與RB-4形成5個(gè)氫鍵(見圖5b)。分子對(duì)接結(jié)果表明:BSA與RB-4之間的主要作用力為疏水作用,同時(shí)還存在一定的靜電作用與氫鍵作用,該結(jié)果與光譜試驗(yàn)結(jié)果一致。3 結(jié)論

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