CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)相對(duì)于鋅指核酸酶（ZFNs）和轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物核酸酶（TALENs）而言,具有操作簡(jiǎn)便、突變效率高等優(yōu)點(diǎn),已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、動(dòng)物科學(xué)、植物科學(xué)等領(lǐng)域。擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶UGT84A1、UGT84A2參與植物次生代謝及外源毒物反應(yīng),并且為同工酶。本研究以擬南芥糖基轉(zhuǎn)移酶同工酶基因UGT84A1和UGT84A2為靶向基因,構(gòu)建CRISPR/Cas9雙突變體表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌浸染擬南芥,從而同時(shí)定向敲除靶向基因。根據(jù)擬南芥轉(zhuǎn)基因后代的測(cè)序結(jié)果,對(duì)獲得的42株陽(yáng)性轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行突變位點(diǎn)分析,結(jié)果表明,有2株陽(yáng)性植株發(fā)生雙突變,由此成功構(gòu)建了ugt84a1/ugt84a2雙突變體。試驗(yàn)結(jié)果可為加快ugt84a1/ugt84a2功能基因資源的開(kāi)發(fā)利用提供有力的理論與方法支持。 

【文章來(lái)源】：江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(20)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 gRNA引物設(shè)計(jì)
    1.3 CPRSPR/Cas9載體的構(gòu)建
    1.4 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化擬南芥
    1.5 擬南芥雙突變體的檢測(cè)
2 結(jié)果與分析
    2.1 sgRNA靶點(diǎn)序列的選擇
    2.2 載體的構(gòu)建及其驗(yàn)證
    2.3 擬南芥雙突變體的篩選與檢測(cè)
        2.3.1 ugt84a1突變體植株嵌合體序列分析
        2.3.2 ugt84a1突變體純合體篩選
        2.3.3 ugt84a1/ugt84a2雙突變體篩選
3 討論與結(jié)論



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