目的:沙門菌質(zhì)粒毒力基因spvC具有磷酸蘇氨酸裂解酶活性,可通過絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信號傳導(dǎo)通路抑制腸道炎癥反應(yīng),促進(jìn)細(xì)菌全身播散。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)該作用與其抑制巨噬細(xì)胞焦亡密切相關(guān)。本研究旨在探究spvC影響巨噬細(xì)胞焦亡的機(jī)制,為控制沙門菌感染提供新的靶點,并為其他相應(yīng)疾病治療提供新的思路。本研究第一部分利用鼠傷寒沙門菌與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)建立感染模型,探討spvC抑制巨噬細(xì)胞焦亡與MAPK信號傳導(dǎo)通路、焦亡相關(guān)炎性小體3（nucleotide-binding oligomerization domain,leucine-richrepeatandpyrindomain-containing3,NLRP3）、炎性小體 4（NLRwith CARD domain-containing 4,NLRC4）及凋亡相關(guān)斑點樣蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC）寡聚的關(guān)系。第二部分利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建敲除焦亡關(guān)鍵蛋白... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１透射電子顯微鏡觀察Ｊ７７４Ａ．１細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?ＴＥＭ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?Ｊ７７４Ａ．１?ｃｅｌｌｓ??（Ｗｈｉｔｅ?ａｒｒｏｗｈｅａｄｓ，?ｂａｃｔｅｒｉａ；?ｂｌａｃｋ?ａｒｒｏｗｈｅａｄｓ，?ＰＩＴｓ；?ｗｈｉｔｅ?ａｒｒｏｗｓ，?ｒｕｐｔｕｒｅｄ?ｐｌａｓｍａ??ｍｅｍｂｒａｎｅｓ．?Ｓｃａｌｅ?ｂａｒ，?５?｜ｉｍ．）??１７??

?ｎ?ｍ?＿??ｃ?＾?ｆ?：?［ｍｉ?ＳＴＭ－ｃ－ｓｊ＾ｖＣ??？；?＾?１０－?Ｓｉｎ?ａ：??｜ｌ〇５－?Ｐ［｜?Ｉ?Ｉ?｜；??ｊ，曬酬ｌ?｜ｌ曬丨??Ｃｏｎｔｒｏｌ?２ｈ?８ｈ?１６ｈ?２４?ｈ??ｔｔｉｉ？ｉｉｉｉｔｉｉｉｉｉｗ？ｉｆｉｉｉｉ＜ｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉ＾ｉｉ？ｉｉ＾ｉｎｉｉｉｉＭ—ｗｉｉｉｗｉｌｒ?ＷＭｇｇａｆｉｇＭｆｔａａｅｉｇｓａｓｆｆｇａｓａｔｆｉＢＢｔｅＫ?ＲｉｕｊＷＢＷＭｗｉｕｗｗＭｗＭｒｉＷｉｉｎｉｉｉｗｗｗｎｎ??Ｔｉｍｅ??圖１．４?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測Ｊ７７４Ａ．１細(xì)胞ｐ３８磷酸化水平??Ｆｉｇｕｒｅ?１．４?Ｐｈｏｓｐｈｏ－ｐ３８?ｏｆ?Ｊ７７４Ａ．?１?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??（＊＊＊＊Ｐ＜?０．０００１，?＊Ｐ＜?０．０５）??２．２．２沙門菌質(zhì)粒毒力基因孕ｖＣ對炎性小體ＮＬＲＰ３、ＮＬＲＣ４的影響??課題組前期用沙門菌感染的巨噬細(xì)胞發(fā)現(xiàn)５ｐｖＣ可在感染后期抑制與細(xì)胞焦??亡密切相關(guān)的炎性小體ＮＬＲＰ３和ＮＬＲＣ４的表達(dá)，為進(jìn)一步探究＃ｖＣ在沙門菌??感染巨噬細(xì)胞早期的生物學(xué)效應(yīng)，將三株受試菌分別與過夜培養(yǎng)至對數(shù)生長期的??Ｊ７７４Ａ．１細(xì)胞共作用，于不同時間點提取各感染組全細(xì)胞裂解液總蛋白，Ｗｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ檢測炎性小體ＮＬＲＰ３和ＮＬＲＣ４的蛋白水平。??２．２．２．１?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?檢測?ＮＬＲＰ３?的蛋白水平??三株受試菌與Ｊ７７４Ａ．１共培養(yǎng)２ｈ、４ｈ和８ｈ，?Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ結(jié)果顯不感染后??８?ｈ攜帶５ｐｖＣ沙門菌感染的巨噬細(xì)胞Ｊ７７４Ａ．１細(xì)胞中焦亡相關(guān)蛋白Ｎ

Ｃ抑制巨噬細(xì)胞焦亡的機(jī)制研宂?第一部分??２?５－ｉ?Ｉ—————Ｉ??＊?以；＾國?Ｃｏｎｔｒｏｌ??Ａ?■??☆?３：?２．０－?Ｅ?丨?Ｅ３?ＳＴＭ－ＷＴ??＊｜?ｓ?ｆ＂！?＝?ｊ?Ｂ?ＳＴＭ－ＪｓｐｉＣ??ｆ?ｆ?ａ?＝?ｉｆｉ?ＩＥ３Ｉ?ＳＴＭ?ｃ?ｓ／ｎＣ??Ｚ?Ｓ?＝?ｆｔ?＝??—ｆｉＬ?ｉｂｉ?－??Ｅ?Ｅ??２?０．５－?：?５?＝??－。。＿丨丨■曜１．??Ｃｏｎｔｒｏｌ?２?ｈ?４?ｈ?＿?—??Ｔｉｍｅ??圖１．５?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測Ｊ７７４Ａ．１細(xì)胞ＮＬＲＰ３蛋白水平??Ｆｉｇｕｒｅ?１．５?ＮＬＲＰ３?ｏｆ?Ｊ７７４Ａ．?１?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ａｎａｌｙｚｅｄ?ｂｙ?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ??（＊＊＊＊Ｐ＜?０．０００１）??２．２．２．２?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?檢測?ＮＬＲＣ４?的蛋白水平??三株受試菌與〗７７４八．１共培養(yǎng)２１１、４１１和８１１，＇＾５１６〇１５１〇１結(jié)果顯示感染后??８?ｈ攜帶沙門菌感染的巨噬細(xì)胞Ｊ７７４Ａ．１細(xì)胞中焦亡相關(guān)蛋白ＮＬＲＣ４低于??敲除株感染組。??ＳＴＭ－ＷＴ?－?＋?－?－?＋?－?－?＋?－?－??ＳＴＭ－／ｄ５／＞ｖＣ?－??ＳＴＭ－ｃ－ｓｐｖＣ?－?－?－?＋?－?－?＋?－?－?＋??ＮＬＲＣ４?？?．為－一丨一辦．?ｍｏｍｒｎ．ｍ?？?１１０?ｋＤａ??Ｈｉｓｔｏｎｅ?Ｈ３?１７?ｋＤａ??２ｈ?４ｈ?Ｌ?版―—Ｊ??二了?Ｃｏｎｔｒｏｌ??＾?ｒ－？?—??＞－Ｘ?．?．?Ａ?＾?ＳＴＭＷＴ??＊－


本文編號：3455874